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xiaotian1086

金虫 (小有名气)


[交流] 如何设计引物来避免转基因植株内源基因的扩增

本课题拿到这样一个转基因小麦材料,即通过基因枪方法将玉米中的一基因转到小麦中,且小麦中也有该基因,只是至今还未被克隆出来,也没有序列可供参考。该基因在玉米中表达量很高,在小麦中有微弱的表现。最近想通过荧光定量PCR的方法检测该基因在转基因小麦植株中中的表现,如何设计引物来避免内源基因的扩增呢!
请虫友们集思广益,帮我解决这个头痛的问题吧
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gcworm

木虫 (职业作家)



xiaotian1086(金币+1): 谢谢参与
路过,帮你顶一下
14楼2012-09-23 19:05:11
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查看全部 19 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★
xiaotian1086(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助了 2012-09-24 10:28:05
嗯................
       我觉的这样没法做,如果不知道序列的话,要是同源性高的话怎么设计都会扩增出来的吧,如果可能的话,个人觉得是应该先克隆出小麦中的这个基因,如果要PCR来做外源基因检测的话,也需要构建内源基因缺陷的突变体,用干扰或用T-DNA插入来做,后将玉米的这个基因转入来看表达。本来PCR式的检测就很怕这种有干扰出现的假阳性,你越这样做的话,个人觉得很难弄。
       是否可以将玉米中这个基因带上标签,转入小麦,然后用抗这个标签的抗体来Western检测蛋白水平的表达,这样来做是否可行呢?
       个人看法,若有说错请高人指点

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2楼2012-09-21 20:39:00
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junminh

铜虫 (小有名气)



xiaotian1086(金币+1): 谢谢参与
把内源基因先弄出来,PCR或测序什么的,或者P下,如果P不出来,也就说明无影响,这样就可以避免了。
5楼2012-09-22 16:44:28
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xiaotian1086

金虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-21 20:39:00
嗯................
       我觉的这样没法做,如果不知道序列的话,要是同源性高的话怎么设计都会扩增出来的吧,如果可能的话,个人觉得是应该先克隆出小麦中的这个基因,如果要PCR来做外源基因检测的话,也需要构 ...

思路很广,学习啦
8楼2012-09-22 20:08:14
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