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connieba

新虫 (小有名气)

[求助] 全式金的pEASY-EI载体和目的基因连不上

做了很多次了,大小2.7kb的目的基因一直连不上pEASY-E1载体。感受态和载体确定都没有问题,步骤也完全按照说明书上的做的。转化Trans-T1感受态后涂Amp平板,能长出单菌落,但是挑取单菌落做菌落PCR都呈阴性。实在是找不到原因了,望好心人帮助~是实验手法的问题吗?之前也做过连接1.8Kb目的基因的,很顺利的就连上了~
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genius517

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-21 13:52:28
嗯......................
       这个pEASY-E1是T载体吗?是的话先确保A尾。2.7K有些大了,其他都没有问题的话,试下延长连接时间,过夜较好,并确保2.7K的回收条带纯度高。
       实在不行,就换载体,推荐Pro ...

链接的时候最好要轻拿轻放,再做一次试试
9楼2014-04-18 13:41:54
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