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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

[求助] 测序发现在载体区域少了一个碱基…………

生工发回来的的拼接结果中第20个碱基有缺失,但是两条引物与目的片段都是正确的,不是说开头30个甚至70个bp的碱基都不太准确麽?想求证一下.
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

引用回帖:
7楼: Originally posted by gelois at 2012-09-20 15:27:51
看你的图谱基本上是测序的问题,一开始的峰形很杂乱,如果有错误的话基本可以忽略。
况且该错误并不是发生在你的目的基因片段,对你目的蛋白的表达纯化一般是不会有影响的。你可以放心做下一步。...

谢谢,我是最近GST融合蛋白纯化做的纠结,就从源头开始找问题……看看是不是表达载体构建的问题……
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10楼2012-09-20 16:09:43
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-20 15:37:26
生工测序回来的不是会有碱基的波形图么?你可以看一下那个图,在对应的碱基的位置,波形图是整齐的还是杂乱的,如果是杂乱的,那么很有可能就是测序的问题。如果是整齐的,那么再看对应的颜色,也有可能是最后漏了的。

一般我们都只会看目的片段的序列是否正确。
反正测序结果,开头和结尾的一段会比较常见的出现问题,波形杂乱。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-09-20 10:46:23
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by gelois at 2012-09-20 10:46:23
生工测序回来的不是会有碱基的波形图么?你可以看一下那个图,在对应的碱基的位置,波形图是整齐的还是杂乱的,如果是杂乱的,那么很有可能就是测序的问题。如果是整齐的,那么再看对应的颜色,也有可能是最后漏了的 ...

关键是测序结果的波形图没有返还给我,打电话问了生工测序的技术部,说是不用担心,这个问题很正常很自然,测序只有70bp之后的碱基才能保证是正确的,之前的序列由于机器的问题,不能保证只能作为参考,我说要加测那段序列也说没有必要,又贵,还要重新设计引物什么的,我想想下午还是重新送一批去测序吧.
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3楼2012-09-20 12:05:51
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ysn5048

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
载体碱基出现缺失的情况是很少见的,应该是生工测序前几十个片段出现了误差导致的
有时候,一句话,可以改变未来
4楼2012-09-20 12:59:29
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