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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

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[求助] His Tag融合蛋白纯化

pET-28a/BL21表达得到目的蛋白，部分可溶，部分包涵体，使用Novagen的kit对可溶蛋白进行纯化遇到如下问题：使用BugBuster抽提试剂处理菌液后得到可用于上柱纯化的蛋白溶液置于4度保存过夜均发生沉淀，-20度冻存也出现沉淀（电泳检测过，目的蛋白就在沉淀中），这样还能继续上柱纯化可溶性蛋白吗？怎样才能使蛋白不发生沉淀？有人遇到类似的问题吗？请各位高手指点。

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1楼 2012-09-18 15:05:18

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hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

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蛋白是溶在抽提试剂里的，试剂盒提供的，含有1M NaCl，没有变性，也没加任何其他的东西，包括还原剂等。我希望得到的是可溶性的蛋白。刚刚抽提完对沉淀和上清进行电泳检测后确认目的蛋白是在上清里的，我将该上清溶液刚在冰箱里过夜，准备第二天用树脂进行纯化的，但是发现溶液里出现沉淀了。我对发生沉淀的溶液离心后的上清和沉淀进行了电泳检测，目的蛋白基本都在沉淀里，因此我认为是我的蛋白发生了沉淀。现在请各位指教有什么办法阻止沉淀的出现。不知道加些增容的试剂会不会影响后续的纯化？