应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » His Tag融合蛋白纯化
51/1返回列表
查看: 2395  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] His Tag融合蛋白纯化

pET-28a/BL21表达得到目的蛋白，部分可溶，部分包涵体，使用Novagen的kit对可溶蛋白进行纯化遇到如下问题：使用BugBuster抽提试剂处理菌液后得到可用于上柱纯化的蛋白溶液置于4度保存过夜均发生沉淀，-20度冻存也出现沉淀（电泳检测过，目的蛋白就在沉淀中），这样还能继续上柱纯化可溶性蛋白吗？怎样才能使蛋白不发生沉淀？有人遇到类似的问题吗？请各位高手指点。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-18 15:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)
蛋白是溶在抽提试剂里的，试剂盒提供的，含有1M NaCl，没有变性，也没加任何其他的东西，包括还原剂等。我希望得到的是可溶性的蛋白。刚刚抽提完对沉淀和上清进行电泳检测后确认目的蛋白是在上清里的，我将该上清溶液刚在冰箱里过夜，准备第二天用树脂进行纯化的，但是发现溶液里出现沉淀了。我对发生沉淀的溶液离心后的上清和沉淀进行了电泳检测，目的蛋白基本都在沉淀里，因此我认为是我的蛋白发生了沉淀。现在请各位指教有什么办法阻止沉淀的出现。不知道加些增容的试剂会不会影响后续的纯化？
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-20 17:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
导致蛋白沉淀的原因很多。
主要还是PH问题，不知知道你的蛋白等电点是多少，抽提试剂的PH是不是在等电点附近，所以导致沉淀。
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-18 15:45:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyhl

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dshlove at 2012-09-18 15:45:45
导致蛋白沉淀的原因很多。
主要还是PH问题，不知知道你的蛋白等电点是多少，抽提试剂的PH是不是在等电点附近，所以导致沉淀。

等电点是4.9，溶在PBS（PH7.4）里也沉淀的。还有别的可能吗？请教！
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-19 10:30:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-09-20 15:26:41
引用回帖:
3楼: Originally posted by hyhl at 2012-09-19 10:30:53
等电点是4.9，溶在PBS（PH7.4）里也沉淀的。还有别的可能吗？请教！...

如果方便的话能不能说一下你的大致步骤，因为我不知道你的问题出在什么地方。
你的蛋白解冻后也会出现沉淀，4℃过夜也会沉淀。不知道你加了还原剂了没有，比如说DTT或者TCEP.还有，你的盐浓度是多少？
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-19 10:35:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 11:52 by l0VvVHGBGRLv
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:30 by l0VvVHGBGRLv
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:18 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-30 10:33 by winsaint
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 3/150 2026-08-30 09:43 by KNIGHT2011
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 06:55 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 06:11 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭