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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高保真酶扩的产物如何加A尾巴
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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 高保真酶扩的产物如何加A尾巴

高保真酶P的产物如果不用加A试剂盒的情况下如何加A，或者平末端能直接连T载体吗？求大神指点
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1楼 2012-09-17 22:44:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huoyongting

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bluysky0902 at 2012-09-18 20:43:07
能不能说详细些，各加多少的量，谢谢~...

跟你正常的PCR反应体系一样，模板就用全部的回收产物，不加引物，其它都一样，另外建议加A后最好过柱回收，要不会影响TA连接效率
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6楼2012-09-22 16:28:03
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liguoqing10

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

实验室用的是taqmix ，1:1 ，72℃，10-30min
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10楼2012-11-11 21:49:39
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普通回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物回收后再用Taq酶于72度反应5-10分钟即可（包括buffer及dNTP）
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weining1203
2楼2012-09-17 23:31:45
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weining1203

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-09-17 23:31:45
PCR产物回收后再用Taq酶于72度反应5-10分钟即可（包括buffer及dNTP）

谢谢回复！pcr产物是要胶回收吗？
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3楼2012-09-18 09:26:33
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ximenzoe

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-09-17 23:31:45
PCR产物回收后再用Taq酶于72度反应5-10分钟即可（包括buffer及dNTP）

正解！
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4楼2012-09-18 17:36:17
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bluysky0902

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-09-17 23:31:45
PCR产物回收后再用Taq酶于72度反应5-10分钟即可（包括buffer及dNTP）

能不能说详细些，各加多少的量，谢谢~
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5楼2012-09-18 20:43:07
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shuangzi8761

银虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by huoyongting at 2012-09-22 16:28:03
跟你正常的PCR反应体系一样，模板就用全部的回收产物，不加引物，其它都一样，另外建议加A后最好过柱回收，要不会影响TA连接效率...

求教 我30UL回收的量 如何操作？
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7楼2012-11-10 15:29:39
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tulip1213

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

直接加入Taq酶，延伸10分钟
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8楼2012-11-10 19:29:45
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liuan6126

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

配个50ul的Taq酶反应体系，72°10min,柱回收。
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9楼2012-11-11 11:12:50
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