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czcpudai

铜虫 (正式写手)

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性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 大家好，在RT的时候，如果加入RNA的量远远超过了试剂盒所规定的，会有什么影响？

试剂盒中要求的最大合成量是1ug，我前几天加过了4.5ug，结果跑胶的时候出来假阳性，而且只有假阳性，目的条带都没有，RNA质量检测OD比值为2.1，这种情况下是不是由于RNA的量太多，杂合链中的RNA还是没有除去，杂合链影响了PCR的扩增影响呢？？？？？请解释一下

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1楼 2012-09-17 09:01:52

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weishu杯子

银虫 (初入文坛)

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专业: 生物技术

引用回帖:

5楼: Originally posted by czcpudai at 2012-09-17 16:37:48
恩，我觉得还是完整性出现了问题了吧我想请教您一下，您做rt的时候，是RNA出来之后直接做RT呢，还是先要测定其浓度和电泳检测其完整性后再进行RT？我是这样想的，为了RNA完整性，我直接先不测RNA浓度，先做RT，然 ...

最好先确定下其浓度和完整性，这样能保证RT的成功。