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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 大家好，在RT的时候，如果加入RNA的量远远超过了试剂盒所规定的，会有什么影响？

试剂盒中要求的最大合成量是1ug，我前几天加过了4.5ug，结果跑胶的时候出来假阳性，而且只有假阳性，目的条带都没有，RNA质量检测OD比值为2.1，这种情况下是不是由于RNA的量太多，杂合链中的RNA还是没有除去，杂合链影响了PCR的扩增影响呢？？？？？请解释一下
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1楼 2012-09-17 09:01:52
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fhj20050708 at 2012-09-19 08:39:53
可能还是楼主的rna质量不太好吧，我上次消化DNA后浓度是7100ug/ml,260/280=1.97,260/230=2.2,反转录时加入的总rna=3.55ug，另一管总rna=2.13ug（TAKARA的反转录酶），反转录时rna多加得到的cdna进行pcr后目的基因条 ...

恩 我试剂盒上面写的是10ng-1ug的量 反转录酶是200U 的量  质量不太好吧
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10楼2012-09-19 10:58:11
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cxfans

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这倒不至于把 RNA纯度不好会影响
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2楼2012-09-17 10:30:58
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人觉得还是你的ＲＮＡ质量不是太好，OD比值2.1是OD260/280还是OD260/230呢？
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持之以恒、永不放弃！
3楼2012-09-17 16:31:02
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-17 16:31:02
个人觉得还是你的ＲＮＡ质量不是太好，OD比值2.1是OD260/280还是OD260/230呢？

OD260/280的比值是2.1   OD260/230的是1.8，我现在感觉只要OD260/280的比值超过了2.0，就很难出来好的结果啊！就是他两的比值是1.6也比比值是2.1的要好啊！
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4楼2012-09-17 16:34:14
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