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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？
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zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)

[求助] 用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？ 已有1人参与

用Trizol抽提水稻叶片RNA，电泳检测后发现有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ进行处理除去残留的DNA。DNaseⅠ说明书上说的是处理完后可以用RNA纯化试剂盒进行纯化（这个试剂盒实验室没有，所以不用该方法），或者加入一定量的EDTA终止反应并65℃加热10min，但这种方法会有残留有各种离子。现在我想问的是：这个EDTA是如何配制才能保证不含有RNase，同时残留的各种离子是否会对后续的反转录和RT-PCR有影响？？或者可否不用EDTA，而直接将DNaseⅠ处理的RNA溶液80℃处理10min以便去除DNaseⅠ（网上显示该酶在80摄氏度处理10分钟后将永久灭活）。
请问大家是如何处理RNA中混有的DNA呢？？谢谢各位了·····
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1楼 2012-09-16 11:05:22
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by beescity at 2012-09-18 12:48:14
您说的是试剂盒里的过程吧。有些试剂盒就有去除蛋白和DNA的过程。我用过invitrogen的提取试剂盒，就没专门说的去除DNA过程，有几个wash buffer，应该就是您说的去除蛋白质过程。是不是，我也不知道。...

不是试剂盒，就是后面的苯酚、氯仿之类的抽提过程，75%乙醇洗涤以及后面的沉淀过程。
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15楼2012-09-18 15:06:11
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你买的专门去除DNA的试剂盒里就有啊！
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持之以恒、永不放弃！
2楼2012-09-16 11:17:06
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流经验，热心应助 2012-09-17 13:56:02
嗯.................
       是这样的，用EDTA终止法并加热，我们实验室一般不用，因为我们认为若是有一点残留RNAse的话，65度下10min是非常危险的。所以一般灭活法采用酚氯仿抽提两次，然后醇低温沉淀回收RNA。具体使用方法请移步至：
       http://www.takara.com.cn/explain/B/D2270A.pdf
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Let God do with it as He wills
3楼2012-09-16 12:21:40
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zhouxw1987

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-09-16 11:17:06
你买的专门去除DNA的试剂盒里就有啊！

里面没有EDTA，那个貌似要自己配的····
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4楼2012-09-16 15:28:40
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