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用DNaseⅠ处理RNA中混有的DNA后续操作如何进行？已有1人参与
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用Trizol抽提水稻叶片RNA，电泳检测后发现有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ进行处理除去残留的DNA。DNaseⅠ说明书上说的是处理完后可以用RNA纯化试剂盒进行纯化（这个试剂盒实验室没有，所以不用该方法），或者加入一定量的EDTA终止反应并65℃加热10min，但这种方法会有残留有各种离子。现在我想问的是：这个EDTA是如何配制才能保证不含有RNase，同时残留的各种离子是否会对后续的反转录和RT-PCR有影响？？或者可否不用EDTA，而直接将DNaseⅠ处理的RNA溶液80℃处理10min以便去除DNaseⅠ（网上显示该酶在80摄氏度处理10分钟后将永久灭活）。 请问大家是如何处理RNA中混有的DNA呢？？谢谢各位了····· |
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17楼2014-07-25 13:22:33