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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)

[交流] 在进行荧光扫描的时候，只有出现了倍频峰才能加滤波片吗

我是菜鸟，请教一个问题。我在进行荧光扫描的时候（以280nm激发），虽然没有出现倍频峰，但是我还是做了个小测试，加了滤光片（滤波范围在500到600的样子），结果出来的荧光图谱完全变了，这是为什么？难道没有出现倍频峰就不能添加滤波片吗
如下图：

没有加滤波片



加了滤波片
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1楼 2012-09-10 12:42:24
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 杨晓慧0307 at 2012-09-13 10:19:04
你这加的是激发的335-620nm滤光片么？这可能跟你样品的性质有关。

恩，是激发的335-620nm的滤光片。
我现在就很想知道这个图谱（加了滤光片的）是否可信------在理论上是存在这种可能性，还是完全不可能出现这种情况。
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8楼2012-09-13 10:48:09
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
0602120131(金币+1): 谢谢参与
xbqewpq: 金币+2, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-09-13 17:47:44
加不加滤波片是由你的实验需要所决定的，倍频峰是都会有的，如果能产生荧光峰，并且强度还不错的话，一般倍频峰就被相对弱化了。如果不想被倍频峰影响，可以将扫描范围设置为不包括倍频峰的范围，比如你这个可以设置在300-550nm左右，你自己看荧光峰的情况定（当然这个范围要包含你的荧光峰）。滤波片分发射的和激发的两种，用不同的滤波片，会相应地减弱激发光或发射光（荧光）的强度，也会减弱倍频峰的强度。
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2楼2012-09-10 16:23:21
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0602120131

捐助贵宾 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 杨晓慧0307 at 2012-09-10 16:23:21
加不加滤波片是由你的实验需要所决定的，倍频峰是都会有的，如果能产生荧光峰，并且强度还不错的话，一般倍频峰就被相对弱化了。如果不想被倍频峰影响，可以将扫描范围设置为不包括倍频峰的范围，比如你这个可以设置 ...

嗯，是的，我这个在扫描的时候如果设置300-550nm扫描范围，的确可以得到不错的图谱。
然后根据你的话我有以下疑问：
第一，如果已经得到了不错的荧光图谱（没看见明显倍频峰，或者说其强度很小），是不是就不必添加滤波片？--------会不会加了有时候是坏事？比如像上面的这两幅图，加了之后会有这么大的差别
第二，在固定激发波长扫描发射时，我选滤波片选的是excitation filter，对的吗？
第三，是不是只要是添加了滤波片，不管是选择过滤什么波长范围的，对图谱里的所有波长的峰的强度都有影响？
期待你的回答！
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3楼2012-09-10 17:31:42
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)
第一，一般的液体检测应该是不加滤光片的，因为你加了会减弱荧光峰的强度，如果遇到几种物质同时检测，若有特殊需要才会按情况选择滤光片。
第二，如果没有必要是不需要加滤光片的，你好像把它当成了一个必须要选择的参数，你好像在这里存在误区，如果不要滤光片你的谱图能更好看，荧光检测限能更低，那么滤光片不是物极必反了么。另外，excitation filter是对激发光的波长进行滤光的，不管你选的是激发模式还是发射模式，都会存在着激发光源和发射光源，选excitation filter则是对激发光有用，选emcitation filter则是对发射光源有用。
第三，滤光片在我的了解范围内至少分为长波滤光片和短波长滤光片，打个比方，你选短波长350nm的excitation filter，那么意思就是激发光350nm以下的波长都会被滤一下，也就是减弱的作用。其它的类似了。
这些是我个人的经验，希望能帮到你~
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0602120131
4楼2012-09-10 22:29:41
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