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0602120131

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[交流] 在进行荧光扫描的时候,只有出现了倍频峰才能加滤波片吗

我是菜鸟,请教一个问题。我在进行荧光扫描的时候(以280nm激发),虽然没有出现倍频峰,但是我还是做了个小测试,加了滤光片(滤波范围在500到600的样子),结果出来的荧光图谱完全变了,这是为什么?难道没有出现倍频峰就不能添加滤波片吗
如下图:

没有加滤波片



加了滤波片
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0602120131

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送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 杨晓慧0307 at 2012-09-10 22:29:41
第一,一般的液体检测应该是不加滤光片的,因为你加了会减弱荧光峰的强度,如果遇到几种物质同时检测,若有特殊需要才会按情况选择滤光片。
第二,如果没有必要是不需要加滤光片的,你好像把它当成了一个必须要选择 ...

非常感谢!
5楼2012-09-11 08:12:34
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)


★ ★ ★
0602120131(金币+1): 谢谢参与
xbqewpq: 金币+2, 感谢应助,欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-09-13 17:47:44
加不加滤波片是由你的实验需要所决定的,倍频峰是都会有的,如果能产生荧光峰,并且强度还不错的话,一般倍频峰就被相对弱化了。如果不想被倍频峰影响,可以将扫描范围设置为不包括倍频峰的范围,比如你这个可以设置在300-550nm左右,你自己看荧光峰的情况定(当然这个范围要包含你的荧光峰)。滤波片分发射的和激发的两种,用不同的滤波片,会相应地减弱激发光或发射光(荧光)的强度,也会减弱倍频峰的强度。
2楼2012-09-10 16:23:21
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0602120131

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引用回帖:
2楼: Originally posted by 杨晓慧0307 at 2012-09-10 16:23:21
加不加滤波片是由你的实验需要所决定的,倍频峰是都会有的,如果能产生荧光峰,并且强度还不错的话,一般倍频峰就被相对弱化了。如果不想被倍频峰影响,可以将扫描范围设置为不包括倍频峰的范围,比如你这个可以设置 ...

嗯,是的,我这个在扫描的时候如果设置300-550nm扫描范围,的确可以得到不错的图谱。
然后根据你的话我有以下疑问:
第一,如果已经得到了不错的荧光图谱(没看见明显倍频峰,或者说其强度很小),是不是就不必添加滤波片?--------会不会加了有时候是坏事?比如像上面的这两幅图,加了之后会有这么大的差别
第二,在固定激发波长扫描发射时,我选滤波片选的是excitation filter,对的吗?
第三,是不是只要是添加了滤波片,不管是选择过滤什么波长范围的,对图谱里的所有波长的峰的强度都有影响?
期待你的回答!
3楼2012-09-10 17:31:42
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杨晓慧0307

银虫 (小有名气)


第一,一般的液体检测应该是不加滤光片的,因为你加了会减弱荧光峰的强度,如果遇到几种物质同时检测,若有特殊需要才会按情况选择滤光片。
第二,如果没有必要是不需要加滤光片的,你好像把它当成了一个必须要选择的参数,你好像在这里存在误区,如果不要滤光片你的谱图能更好看,荧光检测限能更低,那么滤光片不是物极必反了么。另外,excitation filter是对激发光的波长进行滤光的,不管你选的是激发模式还是发射模式,都会存在着激发光源和发射光源,选excitation filter则是对激发光有用,选emcitation filter则是对发射光源有用。
第三,滤光片在我的了解范围内至少分为长波滤光片和短波长滤光片,打个比方,你选短波长350nm的excitation filter,那么意思就是激发光350nm以下的波长都会被滤一下,也就是减弱的作用。其它的类似了。
这些是我个人的经验,希望能帮到你~

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4楼2012-09-10 22:29:41
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