24小时热门版块排行榜    

查看: 3289  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 有关RT-PCR模板RNA量的问题,请高手解答!!!

各位RT高手,本人在最近在做rt-PCR,分为三个组,一个是空白组,一个是模型组,一个是药物组,想做半定量RT-PCR看看药物在分子水平的作用机制,当做rt-pcr的时候,是不是模板量要加入一样???所谓的模板量到底是指模板的体积量(ul)还是模板的质量(ug)呢????有文献中提到“Equivalent amounts of mRNA were used for the reaction with reverse transcriptase”,指的是加入定量体积的mRNA还是定量ug的mRNA呢??求高手解答!!谢谢!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-11 10:50:22
理论上说,模版量相同是指ug的相同,但是一般我们提取RNA的标准是一致的,加入的DEPC水的量也是一定的,所以做半定量时加入相同体积的的模板就行,此外,有内参基因作为参照,也可以减小系统误差。做半定量时其他条 ...

,我是先做半定量看看效果,然后再做定量的,谢谢了!
8楼2012-09-13 09:08:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-11 15:55:53
rt-pcr不同组间比较时,要量一致,理论上指模版分子量,即数目。但实验中很难平衡,而是使用内参来平衡模板量,常用的内参是,beta-action和tubulin。内参调整一致后,就可以比较各组间的差异了。
生活是一面镜子,要笑着面对!
2楼2012-09-07 21:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-07 21:00:41
rt-pcr不同组间比较时,要量一致,理论上指模版分子量,即数目。但实验中很难平衡,而是使用内参来平衡模板量,常用的内参是,beta-action和tubulin。内参调整一致后,就可以比较各组间的差异了。

恩  有道理!明白了,非常感谢!
3楼2012-09-08 11:43:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-07 21:00:41
rt-pcr不同组间比较时,要量一致,理论上指模版分子量,即数目。但实验中很难平衡,而是使用内参来平衡模板量,常用的内参是,beta-action和tubulin。内参调整一致后,就可以比较各组间的差异了。

您好,我还想问一下,要想做半定量rt-pcr的话,有那几个条件需要摸清楚???  我现在考虑的是RT反应的模板的浓度(前提是模板质量和纯度都好),PCR的循环的数目,其中Mg离子浓度都是按照buffer中来的,没有调节,谢谢解答!
4楼2012-09-10 09:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 15/750 2026-09-01 12:23 by icm639
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见