24小时热门版块排行榜    

查看: 3266  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 有关RT-PCR模板RNA量的问题,请高手解答!!!

各位RT高手,本人在最近在做rt-PCR,分为三个组,一个是空白组,一个是模型组,一个是药物组,想做半定量RT-PCR看看药物在分子水平的作用机制,当做rt-pcr的时候,是不是模板量要加入一样???所谓的模板量到底是指模板的体积量(ul)还是模板的质量(ug)呢????有文献中提到“Equivalent amounts of mRNA were used for the reaction with reverse transcriptase”,指的是加入定量体积的mRNA还是定量ug的mRNA呢??求高手解答!!谢谢!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小技术官

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by czcpudai at 2012-09-10 09:50:37
您好,我还想问一下,要想做半定量rt-pcr的话,有那几个条件需要摸清楚???  我现在考虑的是RT反应的模板的浓度(前提是模板质量和纯度都好),PCR的循环的数目,其中Mg离子浓度都是按照buffer中来的,没有调节,谢 ...

不好意思。具体的实验我还没有操作,我还停留在理论方面。恕不能帮你解答。实在抱歉,建议你多看点这方面的书,论坛上的解答只能供参考的。
生活是一面镜子,要笑着面对!
5楼2012-09-10 10:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-11 15:55:53
rt-pcr不同组间比较时,要量一致,理论上指模版分子量,即数目。但实验中很难平衡,而是使用内参来平衡模板量,常用的内参是,beta-action和tubulin。内参调整一致后,就可以比较各组间的差异了。
生活是一面镜子,要笑着面对!
2楼2012-09-07 21:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-07 21:00:41
rt-pcr不同组间比较时,要量一致,理论上指模版分子量,即数目。但实验中很难平衡,而是使用内参来平衡模板量,常用的内参是,beta-action和tubulin。内参调整一致后,就可以比较各组间的差异了。

恩  有道理!明白了,非常感谢!
3楼2012-09-08 11:43:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-07 21:00:41
rt-pcr不同组间比较时,要量一致,理论上指模版分子量,即数目。但实验中很难平衡,而是使用内参来平衡模板量,常用的内参是,beta-action和tubulin。内参调整一致后,就可以比较各组间的差异了。

您好,我还想问一下,要想做半定量rt-pcr的话,有那几个条件需要摸清楚???  我现在考虑的是RT反应的模板的浓度(前提是模板质量和纯度都好),PCR的循环的数目,其中Mg离子浓度都是按照buffer中来的,没有调节,谢谢解答!
4楼2012-09-10 09:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 17:34 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 17:33 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:14 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 能否申诉? +4 echo8914667 2026-08-30 4/200 2026-08-30 16:03 by sundiv
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:17 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见