应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关RT-PCR模板RNA量的问题，请高手解答！！！
51/1返回列表
查看: 2966  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 有关RT-PCR模板RNA量的问题，请高手解答！！！

各位RT高手，本人在最近在做rt-PCR，分为三个组，一个是空白组，一个是模型组，一个是药物组，想做半定量RT-PCR看看药物在分子水平的作用机制，当做rt-pcr的时候，是不是模板量要加入一样？？？所谓的模板量到底是指模板的体积量（ul）还是模板的质量（ug）呢？？？？有文献中提到“Equivalent amounts of mRNA were used for the reaction with reverse transcriptase”，指的是加入定量体积的mRNA还是定量ug的mRNA呢？？求高手解答！！谢谢！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-07 20:11:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-07 21:00:41
rt-pcr不同组间比较时，要量一致，理论上指模版分子量，即数目。但实验中很难平衡，而是使用内参来平衡模板量，常用的内参是，beta-action和tubulin。内参调整一致后，就可以比较各组间的差异了。

恩  有道理！明白了，非常感谢！
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-08 11:43:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

小小技术官

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-11 15:55:53
rt-pcr不同组间比较时，要量一致，理论上指模版分子量，即数目。但实验中很难平衡，而是使用内参来平衡模板量，常用的内参是，beta-action和tubulin。内参调整一致后，就可以比较各组间的差异了。
赞一下 回复此楼
生活是一面镜子，要笑着面对！
2楼2012-09-07 21:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小技术官 at 2012-09-07 21:00:41
rt-pcr不同组间比较时，要量一致，理论上指模版分子量，即数目。但实验中很难平衡，而是使用内参来平衡模板量，常用的内参是，beta-action和tubulin。内参调整一致后，就可以比较各组间的差异了。

您好，我还想问一下，要想做半定量rt-pcr的话，有那几个条件需要摸清楚？？？  我现在考虑的是RT反应的模板的浓度(前提是模板质量和纯度都好)，PCR的循环的数目，其中Mg离子浓度都是按照buffer中来的，没有调节，谢谢解答！
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-10 09:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小技术官

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by czcpudai at 2012-09-10 09:50:37
您好，我还想问一下，要想做半定量rt-pcr的话，有那几个条件需要摸清楚？？？  我现在考虑的是RT反应的模板的浓度(前提是模板质量和纯度都好)，PCR的循环的数目，其中Mg离子浓度都是按照buffer中来的，没有调节，谢 ...

不好意思。具体的实验我还没有操作，我还停留在理论方面。恕不能帮你解答。实在抱歉，建议你多看点这方面的书，论坛上的解答只能供参考的。
赞一下 回复此楼
生活是一面镜子，要笑着面对！
5楼2012-09-10 10:20:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭