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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » pET28a载体和目的基因
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蛋白之家

新虫 (小有名气)

[交流] pET28a载体和目的基因

现在想将目的基因连到载体上，转入大肠杆菌中，然后测目的基因所代表的酶的活性。但是pET28a作为载体，有人说如果目的基因连到这个载体上，测酶活的话，酶是没有活性的。
不清楚这里面的原因，到底是为什么？
难道说目的基因连到载体上在大肠杆菌中不表达？还是什么原因
请大家帮忙  谢谢
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1楼 2012-09-07 18:35:47
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王礼鹏

金虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你是构建表达载体并表达目的蛋白，然后测其活性吗？你是不是已经表达出目的蛋白但没有活性还是还没有做？你的表述有点模糊。
如果你想确定目的基因是否连上载体，你可以酶切鉴定或者是菌液pcr。如果是你已经表达出来了，但没有活性，那原因就可能有很多了，比如你表达的是包涵体，或是你操作中的一系列问题。你能否把你的经过说具体一点。
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5楼2012-09-08 07:53:44
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馋猫

银虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你说的太笼统
有没有活性只有测了之后才知道
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3楼2012-09-07 22:29:04
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windsor2011

银虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
正如2楼所说，首先，做实验你做了才知道，别人说的不一定对，只有自己做了才知道。其次，你表述的不清楚。楼主还是先试试再做结论。
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4楼2012-09-07 22:48:34
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蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-09-08 07:53:44
你是构建表达载体并表达目的蛋白，然后测其活性吗？你是不是已经表达出目的蛋白但没有活性还是还没有做？你的表述有点模糊。
如果你想确定目的基因是否连上载体，你可以酶切鉴定或者是菌液pcr。如果是你已经表达出 ...

首先谢谢您的提醒。
主要是我还没有连上呢  因为之前的那个表达载体不合适  所以现在想换个载体，找了好久实验室就只有这个pET28a，听说这个载体本身就是个包涵体。我就是想知道如果我选用了这个载体，把目的基因连到这个载体上，我能不能测酶的活性，以及原因。
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6楼2012-09-08 08:47:03
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