应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » pET28a载体和目的基因
51/1返回列表
查看: 2689  |  回复: 9
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)

[交流] pET28a载体和目的基因

现在想将目的基因连到载体上，转入大肠杆菌中，然后测目的基因所代表的酶的活性。但是pET28a作为载体，有人说如果目的基因连到这个载体上，测酶活的话，酶是没有活性的。
不清楚这里面的原因，到底是为什么？
难道说目的基因连到载体上在大肠杆菌中不表达？还是什么原因
请大家帮忙  谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-09-07 18:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

馋猫

银虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你说的太笼统
有没有活性只有测了之后才知道
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-07 22:29:04
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

windsor2011

银虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
正如2楼所说，首先，做实验你做了才知道，别人说的不一定对，只有自己做了才知道。其次，你表述的不清楚。楼主还是先试试再做结论。
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-07 22:48:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你是构建表达载体并表达目的蛋白，然后测其活性吗？你是不是已经表达出目的蛋白但没有活性还是还没有做？你的表述有点模糊。
如果你想确定目的基因是否连上载体，你可以酶切鉴定或者是菌液pcr。如果是你已经表达出来了，但没有活性，那原因就可能有很多了，比如你表达的是包涵体，或是你操作中的一系列问题。你能否把你的经过说具体一点。
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-08 07:53:44
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-09-08 07:53:44
你是构建表达载体并表达目的蛋白，然后测其活性吗？你是不是已经表达出目的蛋白但没有活性还是还没有做？你的表述有点模糊。
如果你想确定目的基因是否连上载体，你可以酶切鉴定或者是菌液pcr。如果是你已经表达出 ...

首先谢谢您的提醒。
主要是我还没有连上呢  因为之前的那个表达载体不合适  所以现在想换个载体，找了好久实验室就只有这个pET28a，听说这个载体本身就是个包涵体。我就是想知道如果我选用了这个载体，把目的基因连到这个载体上，我能不能测酶的活性，以及原因。
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-08 08:47:03
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭