应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » pET28a载体和目的基因
101/1返回列表
查看: 3347  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蛋白之家

新虫 (小有名气)

[交流] pET28a载体和目的基因

现在想将目的基因连到载体上，转入大肠杆菌中，然后测目的基因所代表的酶的活性。但是pET28a作为载体，有人说如果目的基因连到这个载体上，测酶活的话，酶是没有活性的。
不清楚这里面的原因，到底是为什么？
难道说目的基因连到载体上在大肠杆菌中不表达？还是什么原因
请大家帮忙  谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-07 18:35:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

馋猫

银虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你说的太笼统
有没有活性只有测了之后才知道
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-07 22:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windsor2011

银虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
正如2楼所说，首先，做实验你做了才知道，别人说的不一定对，只有自己做了才知道。其次，你表述的不清楚。楼主还是先试试再做结论。
赞一下 回复此楼
4楼2012-09-07 22:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你是构建表达载体并表达目的蛋白，然后测其活性吗？你是不是已经表达出目的蛋白但没有活性还是还没有做？你的表述有点模糊。
如果你想确定目的基因是否连上载体，你可以酶切鉴定或者是菌液pcr。如果是你已经表达出来了，但没有活性，那原因就可能有很多了，比如你表达的是包涵体，或是你操作中的一系列问题。你能否把你的经过说具体一点。
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-08 07:53:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-09-08 07:53:44
你是构建表达载体并表达目的蛋白，然后测其活性吗？你是不是已经表达出目的蛋白但没有活性还是还没有做？你的表述有点模糊。
如果你想确定目的基因是否连上载体，你可以酶切鉴定或者是菌液pcr。如果是你已经表达出 ...

首先谢谢您的提醒。
主要是我还没有连上呢  因为之前的那个表达载体不合适  所以现在想换个载体，找了好久实验室就只有这个pET28a，听说这个载体本身就是个包涵体。我就是想知道如果我选用了这个载体，把目的基因连到这个载体上，我能不能测酶的活性，以及原因。
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-08 08:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
有人说28a表达蛋白酶活性，猜测可能是28a在连接目的片段的时候酶切位点不好设计，容易引入载体或者外源核苷酸的缘故吧。其实表达出来的蛋白是溶解状态还是包涵体跟蛋白本身的性质以及诱导量有关。在表达前最好查阅资料，了解蛋白的性质，选择合适的载体以及宿主，比如二硫键的数量等等，就可以选择相应的宿主。祝好运！
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-08 10:16:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chibang1220

木虫 (著名写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
是不是那个酶在大肠里表达后无法折叠成正确的构像？
赞一下 回复此楼
9楼2012-09-08 18:54:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
★
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
你表述的确实不够明白，这些楼上的已经提到过，还有就是你转的大肠杆菌是BL21吗？
赞一下 回复此楼
10楼2012-09-09 09:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
goingabroad2楼
2012-09-07 19:06   回复  
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
gcworm8楼
2012-09-08 18:20   回复  
蛋白之家(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 蛋白之家 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:03 by l0VvVHGBGRLv
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:30 by l0VvVHGBGRLv
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-30 11:10 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭