| 查看: 1307 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
我的PCR结果让我郁闷了啊，有图有真像……
|
||
图中是用RNA反转录后的cDNA为模板进行的PCR，我的目的条带在740bp，引物设计的时候，是没有引物二聚体的，退火温度是在低于TM值4度，变性45s，延伸45s；30个循环。可是出来的确实这样的情况，请各位大侠帮助分析下，到底是什么情况？ 1_副本_副本.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有172人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
-
两个氟原子与一段氨基甲酸甲酯：BLU-5937 的母液配制与稳定性边界
已经有0人回复
-
司美那非（TPN171）：从嘧啶酮母核到工艺放大的结构、色谱与质控参数解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 原核表达载体构建，测序不成功
已经有20人回复
- 有没有博友今年考天大的现代设计方法这门专业课啊
已经有12人回复
- 关于我的研究课题：水稻抗病基因的表达研究
已经有4人回复
- 【求助/交流】怎么做都提不出DNA，请高手帮一下忙喽！！！！
已经有52人回复
- 想和山东新时代药业解约，但回复说要等一个月才有结果，真郁闷！！
已经有22人回复
- 【分享】关于碳化糖和硫化糖的说明
已经有30人回复
- 投‘JCIS的文章又被拒了，我现在已经被拒N次了！真郁闷，不知什么时间能够成功呀
已经有3人回复
小小技术官
木虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 4529.4
- 散金: 248
- 红花: 6
- 帖子: 768
- 在线: 232.5小时
- 虫号: 1972611
- 注册: 2012-09-04
- 性别: GG
- 专业: 常微分方程与动力系统
6楼2012-09-08 19:08:36
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-09-07 13:45:40
linxi185856: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢，我再改变引物等条件尝试下 2012-09-12 21:20:16
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-09-07 13:45:40
linxi185856: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢，我再改变引物等条件尝试下 2012-09-12 21:20:16
|
产生大分子量的弥散条带，大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的。 建议：可将将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10（或1:100-1:200）；另外， 在PCR扩增阶段，尽可能提高扩增用的模板的纯度，适当提高退火温度或使用touchdown（二阶段温度法）的方法重新扩增；或者设计内外两对引物，采用半巢式或者巢式PCR的扩增方法，以提高产物的特异性。 |
2楼2012-09-07 09:41:00
huguangdong
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 10532.4
- 散金: 858
- 红花: 102
- 帖子: 4271
- 在线: 1581.2小时
- 虫号: 1009663
- 注册: 2010-05-01
- 专业: 畜牧学
3楼2012-09-07 10:11:42
4楼2012-09-08 17:06:12
