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我的PCR结果让我郁闷了啊，有图有真像……
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图中是用RNA反转录后的cDNA为模板进行的PCR，我的目的条带在740bp，引物设计的时候，是没有引物二聚体的，退火温度是在低于TM值4度，变性45s，延伸45s；30个循环。可是出来的确实这样的情况，请各位大侠帮助分析下，到底是什么情况？ 1_副本_副本.jpg |
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小小技术官
木虫 (正式写手)
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6楼2012-09-08 19:08:36
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-09-07 13:45:40
linxi185856: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢，我再改变引物等条件尝试下 2012-09-12 21:20:16
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linxi185856: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 谢谢，我再改变引物等条件尝试下 2012-09-12 21:20:16
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产生大分子量的弥散条带，大多数情况下是由于退火温度过低而导致的非特异性的起始及延伸产生的。 建议：可将将反应体系中cDNA的浓度稀释至1:10（或1:100-1:200）；另外， 在PCR扩增阶段，尽可能提高扩增用的模板的纯度，适当提高退火温度或使用touchdown（二阶段温度法）的方法重新扩增；或者设计内外两对引物，采用半巢式或者巢式PCR的扩增方法，以提高产物的特异性。 |
2楼2012-09-07 09:41:00
huguangdong
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