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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 多个基因如何连接？
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aloon111

金虫 (正式写手)

[求助] 多个基因如何连接？

有三个基因A,B,C，按顺序连接，引物均有酶切位点。连接PHT304载体。
请问接连方案：1：将三个基因依次连接到载体？
2：将三个基因连接后再连接到载体？
或其它连接方案？
先谢谢大虾们。
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汇天下之贤
1楼 2012-09-06 10:06:38
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yasmineross

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
scelab: 金币+3, x谢谢热心交流~ :) 2012-09-06 16:07:29
引用回帖:
4楼: Originally posted by aloon111 at 2012-09-06 10:47:15
1500，750，710bp.。如何PCR拼起来？这技术如何掌握...

就是overlapPCR
两个基因连接处设的引物要有15-20bp的重合区，像你这三个基因完全可以拼接后一步连接到载体上。
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6楼2012-09-06 15:54:22
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loop00

木虫 (小有名气)

阿凡达

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aloon111: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-06 11:07:57
scelab: 金币+2, x谢谢热心交流~ :) 2012-09-06 16:07:49
我觉得第一种比较保险，但是比较慢；第二种不用每一次都转化细菌提质粒，但是做的过程中了没有细菌可以养
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坚强面对生活
2楼2012-09-06 10:39:55
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yasmineross

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aloon111: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-06 11:08:13
看你的基因大小了，如果都是小基因，可以PCR拼起来，一次连到载体里；
如果基因大的话，可以分步连接。
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3楼2012-09-06 10:40:37
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aloon111

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yasmineross at 2012-09-06 10:40:37
看你的基因大小了，如果都是小基因，可以PCR拼起来，一次连到载体里；
如果基因大的话，可以分步连接。

1500，750，710bp.。如何PCR拼起来？这技术如何掌握
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汇天下之贤
4楼2012-09-06 10:47:15
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