应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 肝微粒体体外实验操作细节（新手求教）
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
51/1返回列表
查看: 6023  |  回复: 20
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

西风瘦

银虫 (小有名气)

[交流] 肝微粒体体外实验操作细节（新手求教）

本人第一次做体外肝微粒体代谢实验，做药物代谢，用LC-MS/MS测，但是具体细节不知从何入手，希望各位高手不吝赐教！
我是从BD直接购买的肝微粒体成品和NADPH还原系统，不知道微粒体到了之后该怎么样保存，如何解冻？操作要在什么样的器皿里进行呢？需要无菌操作或者有什么特殊要求么？反应15min够吗？反应时间是怎么确定的呢？
整个实验过程操作上有没有什么要求，因从来没做过，真是如何下手操作，先谢过各位高手了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-08-30 15:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhaomin

金虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 西风瘦 at 2012-08-31 10:24:47
我后面要用LC-MS/MS检测，我查到好像是不能用tris做缓冲液吧？PBS里有大量的钠盐，是不是也不太合适？用什么比较好呢？...

可以用的 最后用等体积的乙腈或者甲醇终止反应  离心 上清中的盐不会太多
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-31 15:54:04
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

西风瘦

银虫 (小有名气)
再问一下，最后我要用LC-MS/MS检测，但是我查到一个方法微粒体储备液用浓缩微粒体，里要加磷酸钾盐缓冲液和EDTA配置，但是不知道储存条件和时间？另外，是为了排除质谱的钠干扰才用钾盐缓冲液而不用常用的钠盐缓冲液吗？可是EDTA也是钠盐啊？
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-30 15:35:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuzhaomin

金虫 (著名写手)
★ ★
西风瘦(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-08-31 09:23:21
你需要看文献
一般的操作是微粒体蛋白  0.1mg/ml （需优化） tris-盐酸缓冲液
加入反应的药物 如果是做动力学的话  需要不同浓度的药物 DMSO溶解的话 保证终体积小于1% 然后加入NADPH起始 孵育时间 蛋白浓度 需要摸索 要求是代谢产物的生成和孵育时间及蛋白浓度呈线性关系
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-30 23:52:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kkbyb

木虫 (著名写手)
★ ★
西风瘦(金币+1): 谢谢参与
leecius: 金币+1, 谢谢参与。 2012-08-31 09:23:38
不用的酶最好先不要配制成酶缓冲液，就以买来时的原态于-80度保存，不需无菌，但要避免试剂污染，反应时间根据化合物来，有的1个小时也不代谢，有的15分钟已经没有原型了，你做代谢必须要保证残余30%的原型化合物才比较合适，肯定是需要2次了
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-31 08:58:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭