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lxh502976898

金虫 (小有名气)

[交流] 原核表达载体的构建 已有17人参与

我第一次接触原核表达载体的构建 就一直连接不成功 回收后的目的片段和表达载体做电泳都有单一条带,二者连接液没有任何条带(我用的是宝生物胶回收试剂盒,DNA的浓度特别低,怀疑是这个原因) 无法判断是否连接成功 。前两次直接做转化也没有任何菌长出来,继续帮助,实验停滞了 谢谢啦。。。。
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mgangle

铁杆木虫 (著名写手)

乐乐家族-----乐颠颠

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 股交流 2012-08-27 13:47:09
一般载体1ul,目的片段4ul,连接酶及buffer5ul,这个是用Takara的SolutionI连接的体系,还有你要检查一下自己的转化是否有问题,下次转化时,同时做一个载体质粒的转化来检验此次转化的效率。
麦兜麦兜~~~我要一碗鱼丸粗面。。对不起,么有鱼丸粗面。。那,我要鱼丸么有鱼丸那,我要粗面…………么有粗面那,我要鱼丸粗面……………………
9楼2012-08-24 15:00:12
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cliakro

木虫 (文坛精英)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
"继续帮助"…… 强!虫子立起!
2楼2012-08-23 09:59:19
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cliakro

木虫 (文坛精英)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不懂哇……路过的爬过……
3楼2012-08-23 10:00:05
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09丁于飞

银虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做转化没有任何菌长出来,说明转化有问题,不能确定连接结果如何。另外,DNA回收产物跑胶能看到带,说明DNA浓度足够作连接了。
一般不会用连接液跑胶。
4楼2012-08-23 13:43:33
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