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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于基因敲除设计引物有疑问，求高手。pET28a (+)卡那抗性基因的FRT在什么位置
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yyazmzr

银虫 (小有名气)

[求助] 关于基因敲除设计引物有疑问，求高手。pET28a (+)卡那抗性基因的FRT在什么位置 已有1人参与

刚接触基因敲除这一块，有些不太懂，想从pET28a(+)上扩增卡那基因来敲掉我的目的基因，可是却找不到它上面卡那抗性基因的FRT位点在哪里，找不到序列，不知道怎么设计引物来着，这个FRT位点要怎么找啊。还有一个问题就是同源臂，能直接把我基因的上游片段接在我的抗性基因的上游引物吗？用不用互补一下
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1楼 2012-08-21 20:23:25
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yyazmzr

银虫 (小有名气)
急切中……请高手解惑

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-08-22 07:53:11
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紫玉寒willie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有专门的质粒，pKD4就是kan抗性的，且两端带有FRT位点。可以看看One-step inactivation of chromosomal genes in Escherichia coliK-12 using PCR products这篇文章
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4楼2014-01-20 13:22:14
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