24小时热门版块排行榜    

查看: 2438  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 长片段连接问题 已有8人参与

最近做的回收产物都连不上,所以双酶切后的产物是直接纯化后连接的,基因三千多,载体六千多,连了好久都没连上,转化后的菌斑菌P都是假的.哪位知道怎么回事啊?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gl185

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-14 13:51:10
我觉得是这样子的,我前面带了一个师妹做连接,她也连的是表达载体,前面一直连不上,可是后来连上了。我觉得最大的问题是回收效率的问题,我觉得如果回收的浓度足够高的话,应该连上的几率比较大。还有的就是酶的问题,后来我们也把酶换了,当时改变的就是这两个条件,然后连上了。
7楼2012-08-14 12:24:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-14 13:50:52
我之前连接的片段都比你的大,载体也差不多。较大目的片段往载体上连接有一定的困难,对那些只切掉几十个碱基的载体可以不采取切胶回收的方法,而是用乙醇沉淀法回收载体,此方法使目的片段较易连接到载体上。
生命即这般无尽变数,辗转来去皆苛求不得
2楼2012-08-13 10:45:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ankang0910

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我去,我和楼主遭遇一样,连片段大小都一样!!!我也连不上!!
敢问乙醇沉淀肿么个做法????
实验顺利!!
3楼2012-08-13 10:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小猫三两只

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ankang0910 at 2012-08-13 10:55:13
我去,我和楼主遭遇一样,连片段大小都一样!!!我也连不上!!
敢问乙醇沉淀肿么个做法????

乙醇沉淀法:产物加2.5倍体积100%酒精(预冷)和1/10倍体积3 M 醋酸钠(pH=5.2,)。-80沉淀30分钟,4度12000rpm离心10 min,再用75%和100%酒精各洗一次就可以了。
不过生工都有纯化试剂盒,10分钟就解决了
4楼2012-08-13 11:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 7/350 2026-09-01 15:18 by myrtle
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见