应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 揪心的菌落PCR
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2642  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MicEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

celia2012

铜虫 (小有名气)

[求助] 揪心的菌落PCR 已有2人参与

几天挑选了单菌落，进行种属鉴定，做了17个菌落PCR，成功了11个，实验过程是：挑菌加入50微升无菌水，99度裂解5分钟，后冰浴五分钟，离心10分钟取上清液进行PCR,退火温度是55度，循环数35，25微升体系（加5微升模板）
     后来继续挑选进行实验，问题不断，P出来的成功率低，不到一半，而且好多出现拖带现象，这在第一次实验中没出现过，后进行测序说是有杂合、结合现象，测序终止，立马心情受到影响了，做了大量的菌落PCR， 几天全浪费了~不知道是什么原因
1.由于我做的菌差异大，要一一摸条件好烦，有的浓度低了，有个又高了，难以控制，挑菌不知道挑多少合适
2.不知道做菌落PCR,是不是要将菌活化一下再挑，菌放在冰箱大概有20天了，菌放的时间长了是不是影响实验
3.退火温度如何确定，多少适合？是否循环数过高了
4.菌落PCR是否可靠？还是直接先提DNA适合？主要是我要做200个菌，提起来麻烦，现在看来菌落PCR也不简单？
希望有经验的虫友们给点意见吧~万分感谢啊~纠结万恶的实验啊~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-09 14:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿博小硕士

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 啤酒泡沫 at 2012-08-09 19:25:59
貌似不行吧。我当时实验的时候，我老师要求带一条且足够亮，采用试剂盒回收。我做的是霉菌。你也可以试试。我11年5月份测序，好像一个样是15块，虽然物价上涨但也不会太多吧。...

你在哪测的？好便宜啊，我也是去年测的，一个序列30，一般一个菌种要正反测，就是60元。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2012-08-10 14:09:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

啤酒泡沫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
celia2012: 金币+3 2012-08-09 19:09:59
zhang8826857: 金币+5, 鼓励新虫，正解 2012-08-10 10:15:47
我做过PCR,是先提取DNA，我做PCR是为了测序，鉴定菌株的。退火温度你可以查查，我记得是有公式的，根据DNA片段大小，可以算出退货温度的范围，然后你做个梯度PCR就能得到最适温度了。PCR的关键是退火温度，循环次数不太重要吧。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-09 17:50:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

celia2012

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 啤酒泡沫 at 2012-08-09 17:50:37
我做过PCR,是先提取DNA，我做PCR是为了测序，鉴定菌株的。退火温度你可以查查，我记得是有公式的，根据DNA片段大小，可以算出退货温度的范围，然后你做个梯度PCR就能得到最适温度了。PCR的关键是退火温度，循环次数 ...

跑电泳结果是有拖带现象，带目的基因也是量的，这样去测序不行吧
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-09 19:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啤酒泡沫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by celia2012 at 2012-08-09 19:09:49
跑电泳结果是有拖带现象，带目的基因也是量的，这样去测序不行吧...

貌似不行吧。我当时实验的时候，我老师要求带一条且足够亮，采用试剂盒回收。我做的是霉菌。你也可以试试。我11年5月份测序，好像一个样是15块，虽然物价上涨但也不会太多吧。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-09 19:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 0703化学 +11 妮妮ninicgb 2026-03-27 11/550 2026-03-29 06:45 by 544594351
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +7 c297914 2026-03-28 7/350 2026-03-29 01:17 by 544594351
[考研] 275求调剂 +10 Micky11223 2026-03-25 14/700 2026-03-28 15:48 by Micky11223
[考研] 材料与化工272求调剂 +9 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 9/450 2026-03-28 15:21 by 1018329917
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-24 4/200 2026-03-28 13:17 by 唐沐儿
[考研] 311求调剂 +3 希望上岸阿小杨 2026-03-23 3/150 2026-03-28 07:57 by 热情沙漠
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 调剂推荐 +5 清酒714 2026-03-26 6/300 2026-03-27 11:12 by 不吃魚的貓
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 352求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 085602 289分求调剂 +8 WWW西西弗斯 2026-03-24 8/400 2026-03-26 16:33 by 不吃魚的貓
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
[考研] 282求调剂 +3 wcq131415 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 一志愿吉林大学材料与化工303分求调剂 +4 为学666 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭