| 查看: 1888 | 回复: 8 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
平端 影响连接吗
|
|||
| 本人原核表达载体构建总是连接不上，会不会是因为酶切位点EcoR V的断口是平末端？？？ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有226人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有67人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-26 15:21:17
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-26 15:21:17
|
一般来说，克隆不成功的原因是载体或外援片段处理不好。常见的情况有两种： 1. 质粒DNA的质量不好，导致载体处理不完全（大量的单切或未酶切载体），连接时出现大量的载体自连，形成大量的背景克隆 2.外源基因片段酶切不好，导致外源基因片段无法连入载体。常见的错误是总担心PCR片段不够，酶切时PCR产物用量太多。事实上，一般由于PCR产物分子量小，完全酶切PCR产物需要的酶量将切同样量的载体DNA所需的酶量多得多。一般来说，PCR产物酶切时，用300--500ng的DNA就足够用了。 关于双酶切设计的问题，可以利用一个在线的双酶切软件double digestion disigner ，我以前在小木虫推荐过，当时免费，现在可能收费了，但仍然可以申请免费使用。 利用该软件进行酶量的精确计算，不用担心酶量是否足够的问题。 |
6楼2012-07-25 20:54:46
scutphoenix
木虫 (正式写手)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 2294.6
- 散金: 150
- 红花: 1
- 帖子: 520
- 在线: 53.8小时
- 虫号: 348663
- 注册: 2007-04-18
- 专业: 病毒学
2楼2012-07-25 15:08:47
3楼2012-07-25 16:12:24
4楼2012-07-25 17:24:35
40