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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 求助，改变流动相比例后出峰完全变了??
汕头大学海洋科学接受调剂
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助，改变流动相比例后出峰完全变了??

求助，这几天在分离六种混合的沙星，还在摸索阶段，很多不懂。。
图一流动相为乙腈：2%甲酸（20：80），第一第二个峰分不开，（图还分得不好，不要见怪，倒峰是溶剂峰），然后我试着调一个比例，调成乙腈：2%甲酸（15：75），（不知道这样调对不对啦~）可是图就变成图2那样了！是什么原因呢？，求各位虫友帮忙。！请问怎样才能把图一的第一第二个峰分开呢？谢谢！

图1，乙腈：2%甲酸（20：80）



图2，乙腈：2%（25：75）
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1楼 2012-07-23 22:52:57
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
改后两峰得到分离，只是第一个峰肯定还没分开。图一中6分钟后的峰在图二中还没跑出来。
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红颜远，相思苦，几番意，难相付。十年情思百年渡，不斩相思不忍顾！
2楼2012-07-23 22:58:23
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xbqewpq at 2012-07-23 22:58:23
改后两峰得到分离，只是第一个峰肯定还没分开。图一中6分钟后的峰在图二中还没跑出来。

那该怎样处理好呢？
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3楼2012-07-23 23:13:24
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fffflower

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Cassandra811: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-25 23:14:11
你改变 比例后，那个3.263min的峰就是前面那两个分离不好的峰。这回更差了。你可以试试降低乙腈的初始比例。用5%乙腈+95%的甲酸试试。然后慢一点走个梯度到70%B试试（开始可以用长一点的时间，如50-60min。分得好再缩短）。另外甲酸浓度也可改变试试。
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4楼2012-07-24 00:07:12
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houqian387

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你的两张图，第一个峰都没有保留，继续减少有机相比例使第一个峰k值尽量在2-10之间，看图可能还存在溶剂效应，楼主尽量用不加缓冲盐的流动相起始比例去溶解样品，不行的话换强度是弱一点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2012-07-24 08:03:41
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你第一个峰是在死时间出峰了，没有保留建议改变下流动相的洗脱强度，可以用梯度走走看。你两张图的进样量是一样的吗？
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6楼2012-07-24 08:06:40
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xing86

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应用梯度洗脱可能会好点
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7楼2012-07-24 09:03:09
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by fffflower at 2012-07-24 00:07:12
你改变 比例后，那个3.263min的峰就是前面那两个分离不好的峰。这回更差了。你可以试试降低乙腈的初始比例。用5%乙腈+95%的甲酸试试。然后慢一点走个梯度到70%B试试（开始可以用长一点的时间，如50-60min。分得好再 ...

你的意思是开始95%甲酸，50分钟梯度到70%甲酸吗？
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8楼2012-07-24 09:49:10
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by houqian387 at 2012-07-24 08:03:41
看你的两张图，第一个峰都没有保留，继续减少有机相比例使第一个峰k值尽量在2-10之间，看图可能还存在溶剂效应，楼主尽量用不加缓冲盐的流动相起始比例去溶解样品，不行的话换强度是弱一点
...

用纯的有机相溶解？
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9楼2012-07-24 09:56:43
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-24 08:06:40
你第一个峰是在死时间出峰了，没有保留建议改变下流动相的洗脱强度，可以用梯度走走看。你两张图的进样量是一样的吗？

相同的~~梯度怎么设计好呢？
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10楼2012-07-24 09:57:38
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