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Cassandra811

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助,改变流动相比例后出峰完全变了??

求助,这几天在分离六种混合的沙星,还在摸索阶段,很多不懂。。
图一流动相为乙腈:2%甲酸(20:80),第一第二个峰分不开,(图还分得不好,不要见怪,倒峰是溶剂峰),然后我试着调一个比例,调成乙腈:2%甲酸(15:75),(不知道这样调对不对啦~)可是图就变成图2那样了!是什么原因呢?,求各位虫友帮忙。!请问怎样才能把图一的第一第二个峰分开呢?谢谢!

图1,乙腈:2%甲酸(20:80)



图2,乙腈:2%(25:75)
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xbqewpq

荣誉版主 (著名写手)

魂兮

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
改后两峰得到分离,只是第一个峰肯定还没分开。图一中6分钟后的峰在图二中还没跑出来。
红颜远,相思苦,几番意,难相付。十年情思百年渡,不斩相思不忍顾!
2楼2012-07-23 22:58:23
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xbqewpq at 2012-07-23 22:58:23
改后两峰得到分离,只是第一个峰肯定还没分开。图一中6分钟后的峰在图二中还没跑出来。

那该怎样处理好呢?
3楼2012-07-23 23:13:24
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fffflower

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Cassandra811: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-25 23:14:11
你改变 比例后,那个3.263min的峰就是前面那两个分离不好的峰。这回更差了。你可以试试降低乙腈的初始比例。用5%乙腈+95%的甲酸试试。然后慢一点走个梯度到70%B试试(开始可以用长一点的时间,如50-60min。分得好再缩短)。另外甲酸浓度也可改变试试。
4楼2012-07-24 00:07:12
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houqian387

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你的两张图,第一个峰都没有保留,继续减少有机相比例使第一个峰k值尽量在2-10之间,看图可能还存在溶剂效应,楼主尽量用不加缓冲盐的流动相起始比例去溶解样品,不行的话换强度是弱一点

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
5楼2012-07-24 08:03:41
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你第一个峰是在死时间出峰了,没有保留建议改变下流动相的洗脱强度,可以用梯度走走看。你两张图的进样量是一样的吗?
6楼2012-07-24 08:06:40
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xing86

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应用梯度洗脱可能会好点
7楼2012-07-24 09:03:09
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by fffflower at 2012-07-24 00:07:12
你改变 比例后,那个3.263min的峰就是前面那两个分离不好的峰。这回更差了。你可以试试降低乙腈的初始比例。用5%乙腈+95%的甲酸试试。然后慢一点走个梯度到70%B试试(开始可以用长一点的时间,如50-60min。分得好再 ...

你的意思是开始95%甲酸,50分钟梯度到70%甲酸吗?
8楼2012-07-24 09:49:10
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by houqian387 at 2012-07-24 08:03:41
看你的两张图,第一个峰都没有保留,继续减少有机相比例使第一个峰k值尽量在2-10之间,看图可能还存在溶剂效应,楼主尽量用不加缓冲盐的流动相起始比例去溶解样品,不行的话换强度是弱一点
...

用纯的有机相溶解?
9楼2012-07-24 09:56:43
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Cassandra811

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yugijiang at 2012-07-24 08:06:40
你第一个峰是在死时间出峰了,没有保留建议改变下流动相的洗脱强度,可以用梯度走走看。你两张图的进样量是一样的吗?

相同的~~梯度怎么设计好呢?
10楼2012-07-24 09:57:38
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