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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时定量PCR，NTC出现荧光曲线
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fukkim

新虫 (著名写手)

[求助] 实时定量PCR，NTC出现荧光曲线

跟着一个博士 做了qPCR，probe是TaqMan，反应体系15uL。标准曲线非常好，R平方在3个9以上。
但是NTC有3个莫名其妙的浅绿色的曲线，x轴上非常向后。她是一个老手了，做了2年多了，她说这种污染好象无法解决。
说明一下她的操作：提取DNA和PCR过程中没有对枪尖和离心管进行灭菌，她说不必要。而且，没有加UNG酶。
我认为有可能是PCR过程中没有使用灭菌枪尖和离心管的原因，另外，也可能是二聚体?
请高手指教。
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No pains, no gains.
1楼 2012-07-22 15:57:10
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yxu1986
2楼2012-07-22 16:55:29
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tiani_tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Taqman法好像与引物二聚体没有关系，很有可能是环境污染造成的，枪头盒离心管之类的肯定是要灭菌的啊
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3楼2012-07-23 12:06:33
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