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独立寒秋

木虫 (正式写手)

[求助] HPLC 经验高手出出主意

各位高手  我在做一个糖脂,糖脂极易溶于在二氯甲烷中,在甲醇中溶解度很小,用HPLC分析 用的是C18的反相柱,分析型, 流动相用的的乙腈 水(均含有0.1%的乙酸)梯度洗脱 具体如下啊:开始50%乙腈+50%水  30分钟后100%乙腈+0%水     30-40分钟100%乙腈   50分钟后再回到50%乙腈+50%水。由于我的样品很容易溶解在二氯甲烷中,开始用二氯甲烷进样10 -20Ul  结果发现跑的很难看,并且前几分钟就出现很难看 并且吸光度很高的鬼峰,(分析可能是二氯甲烷和乙腈水体系不互溶,导致鬼峰)后来用甲醇溶解,上样就没问题,但是问题是样品在甲醇中溶解度很小,峰很小,效果不好,(增大进样量到140ul,效果也不是很好,峰很小)我现在想让高手帮忙,帮我选一个溶剂,能与乙腈水体系互溶,同时对我的样品溶解度很好,请大家帮忙,不胜感激。定重谢!
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xxaijwd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 独立寒秋 at 2012-07-23 14:36:41
非常感谢,我大概判断是鼠李糖脂,我是参考2011年的一篇文献,文献上用的是紫外监测,在210nm处有光吸收,所以我照做了,但是问题是1.不一定是鼠李糖脂,只是很有可能 2. 我将甲醇溶解后,跑HPLC的峰收集了,点板跑 ...

乙腈溶解样品的话也不一定好溶,不知道加酸能不能提高溶解度啊……不过9楼说的用二氯溶解,甲醇稀释的方法可以考虑。另外,没有示差检测器的话有没有蒸发光散射检测器啊?那个也可以处理没有紫外吸收的问题,另外,蒸发光还能跑梯度,有利于你分离啊……
14楼2012-07-23 18:41:11
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xxaijwd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
独立寒秋: 金币+100, 有帮助, 10 2012-07-22 21:01:13
你的样品在流动相中溶解度怎么样啊?如果在乙腈或乙腈-水中溶解度还可以为什么不用流动相溶解样品?(因为我看你流动相里有乙酸,会不会加大你样品的溶解度?)这样峰形会好很多的。
2楼2012-07-22 14:20:47
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sally98

木虫 (正式写手)

实验不息,郁闷不止……

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的样品估计在正相溶剂里溶解度比较好,可以试试正相
3楼2012-07-22 17:49:45
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主还是用正相条件吧 估计分离要好点
4楼2012-07-22 19:33:57
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