| 查看: 4356 | 回复: 21 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
16S rDNA测序问题 已有2人参与
|
||
|
各位前辈，我想请教一下16S rDNA测序问题。我要鉴定一个未知菌，用试剂盒提基因组DNA，然后用通用引物PCR，在1500bp处有很亮的条带，又将PCR产物割胶纯化，然后送去测序，测了两次都没测通。测序公司给了我一下三个可能性。 1.已纯化的PCR样品造成这种情况的原因是由于模板纯化有一定问题，模板中含有非特异性的条带； 2.如果是未纯化的PCR产物，那么有可能是您要求测序的片段周围含有大小相近的条带，我们通过琼脂糖凝胶回收，无法有效切除这种大小差别不是很明显的条带； 3.模板或是引物质量较差，测序反应结束之后没有产生足够的目的产物，导致测序信号较弱，杂背景较高，形成重叠现象。 我看了一些文献，好多就是直接把PCR产物测序，我这个也有条带啊，怎么就测不出来呢？我怀疑是我的菌不够纯，都划线6次以上了。请各位前辈们看看我这问题出在哪里了？ 还有，对于鉴定菌我一直迷茫是先做生理生化鉴定还是先做16S鉴定，做生理生化鉴定我不知道该做哪些指标。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
最近几年招的学生写论文不引自己组发的文章
已经有11人回复
-
写了一篇“相变储能技术在冷库中应用”的论文，论文内容以实验为主，投什么期刊合适？
已经有4人回复
-
需要合成515-64-0，50g，能接单的留言
已经有3人回复
-
中科院杭州医学所招收博士生一名（生物分析化学、药物递送）
已经有3人回复
-
临港实验室与上科大联培博士招生1名
已经有8人回复
-
26申博自荐
已经有7人回复
-
想换工作。大多数高校都是 评职称时 认可5年内在原单位取得的成果吗？
已经有4人回复
-
带资进组求博导收留
已经有9人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
18楼2012-10-10 16:02:16
2楼2012-07-20 09:16:35
girlfisher
金虫 (小有名气)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 1292.1
- 红花: 2
- 帖子: 105
- 在线: 55.9小时
- 虫号: 1049679
- 注册: 2010-06-30
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
3楼2012-07-20 09:52:13
baopeng
木虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 3629.8
- 散金: 20
- 红花: 1
- 帖子: 313
- 在线: 329.8小时
- 虫号: 234570
- 注册: 2006-03-31
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
4楼2012-07-20 12:23:15