24小时热门版块排行榜    

查看: 1235  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

jia8817091

金虫 (小有名气)

[求助] 关于实时定量PCR的问题!!!

小弟刚开始做real time 。现在有个问题,由于我的模板比较多,40多个,如果每个做2个平行的话就是90个左右。可是我们这bio-rad的荧光PCR是96孔,所以每次只能做一个基因。

我想问:1.可不可以这一次只做目的基因,下一次再全做内参基因呢?
        2.如果目的基因和内参基因的退火温度不一样,能不能一起分析啊?
谢谢大家帮帮我吧!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jia8817091 at 2012-07-17 22:39:07
谢谢您,还想请教您一个问题。
我这每组都有6,7个样品,如果每个都做,肯定偏差会很大。
但是如果只挑出1~2个,也不能说明问题。我看有些人把一组的几个模板混和在一起,再做几个平行。。。这样可以吗?感觉好像 ...

多重PCR体系摸索可能要麻烦一些,自己考虑
9楼2012-07-18 09:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

小虫子666

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jia8817091: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-07-17 12:57:05
那你就做完一次目的基因和内参基因,再做一次,共重复3次。
2楼2012-07-17 12:37:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia8817091

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小虫子666 at 2012-07-17 12:37:48
那你就做完一次目的基因和内参基因,再做一次,共重复3次。

我可能说的不是很清楚,我的意思是开始我用机器摸出来了几个基因各自的最适退火温度,比如说我的基因1退火58度,内参退火60度。那么我想说我第一次做用58度做了一批基因1,然后第二次再用60度做了同样模板的内参,在保证他们阈值相同的情况下,能否用deltadeltaCt法分析?(问题就是这两基因温度不同,可以吗?)
3楼2012-07-17 12:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuanyu0202

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jia8817091: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-07-17 18:27:27
一般来说做这种实验内参和目的基因都是同条件处理的,建议取一个比较集中的温度,把一个样本的所有基因都跑完,不行的引物再单独检测,当然同一个模板不同的板子不同的退火温度肯定都要设内参的。
4楼2012-07-17 14:00:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 271材料工程求调剂 +5 .6lL 2026-03-18 5/250 2026-03-19 03:07 by 无懈可击111
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +4 Ymlll 2026-03-18 6/300 2026-03-18 22:15 by li123456789.
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见