应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 无模板pcr合成短片段 一直失败
31/1返回列表
查看: 2850  |  回复: 44
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wy135033405

木虫 (小有名气)

[求助] 无模板pcr合成短片段 一直失败

在下需要合成的片段为107bp，为了节省开支，设计了6条短引物，以数字大致表示如下（一条链的5' 端为起点，互补链也从该方向计数，加' 表示）：

p1: 1-30  p2：15'-45'  p3: 31-60 p4: 46'-75'  p5: 60-90 p6: 76'-107'

如图

6条引物去除重叠部分可以拼凑成目的片段，目前使用多种酶、体系、反应条件均无法p出目的片段，在不重新设计引物的条件下，请大家提供些意见。本帖只为求助，如果确实通过您的方案做出结果，另赠100金币，绝不食言。

图示
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

sunny_andy 小马步步高

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-16 15:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wy135033405: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-17 11:35:30
还是坚持继续PCR吧，实不相瞒，我刚进研一的时候，主要上课，老板让我练手，做了一个32段的，整整P了2个月才将条件确定了。因为那时的PCR仪器只有最简单的，什么梯度，降落都没有。最后就苦闷了2个月才OK。个人建议降低退火温度，延长退火时间试试看。
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-17 09:07:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
13楼: Originally posted by wy135033405 at 2012-07-17 09:27:11
十分感谢，我这个一比就小儿科了啊，32段，您老板也是奇葩……...

呵呵，做过了就还好，一起共勉。
赞一下 回复此楼
14楼2012-07-17 10:07:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wy135033405 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭