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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化后挑菌落,测序是混合克隆,是怎么回事?

最近在做原核表达载体的构建。连接转化后,菌落PCR鉴定为阳性的单菌落送测序后,结果说是混合克隆是怎么一回事,什么是混合克隆?混合克隆能分离出含有目的基因的单克隆吗?还请各位多多指教?
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-11 11:09:40
就是说你的菌里,可能有2个以上载体,或者一个菌落,其实混有2种以上菌。
要不你转化的时候少放点载体?或者涂板子的时候涂开些?板子用大些的?不要等菌长的很大才去挑,只要肉眼看得见菌斑,就可以挑了,一长大, ...

你是说菌里可能同时含有空载体和含有目的基因的载体吗,想问下质粒不是有不相溶性的吗?
4楼2012-07-12 21:54:04
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-11 13:49:05
就是说你的菌里,可能有2个以上载体,或者一个菌落,其实混有2种以上菌。
要不你转化的时候少放点载体?或者涂板子的时候涂开些?板子用大些的?不要等菌长的很大才去挑,只要肉眼看得见菌斑,就可以挑了,一长大,有时候是几个菌斑混着的。
2楼2012-07-11 11:09:40
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-11 11:09:40
就是说你的菌里,可能有2个以上载体,或者一个菌落,其实混有2种以上菌。
要不你转化的时候少放点载体?或者涂板子的时候涂开些?板子用大些的?不要等菌长的很大才去挑,只要肉眼看得见菌斑,就可以挑了,一长大, ...

谢谢,我再试试!
3楼2012-07-11 22:20:48
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-13 16:10:07
你的这种问题,很常见的,菌落pcr的假阳性很高,要保证pcr的真阳性,必须从你的目的载体上设计引物进行pcr,然后进行目的片段的pcr,双重筛选。
coasttocoast。
5楼2012-07-12 22:16:28
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