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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化后挑菌落，测序是混合克隆，是怎么回事？
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化后挑菌落，测序是混合克隆，是怎么回事？

最近在做原核表达载体的构建。连接转化后，菌落PCR鉴定为阳性的单菌落送测序后，结果说是混合克隆是怎么一回事，什么是混合克隆？混合克隆能分离出含有目的基因的单克隆吗？还请各位多多指教？
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1楼2012-07-11 09:02:45
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-11 11:09:40
就是说你的菌里，可能有2个以上载体，或者一个菌落，其实混有2种以上菌。
要不你转化的时候少放点载体？或者涂板子的时候涂开些？板子用大些的？不要等菌长的很大才去挑，只要肉眼看得见菌斑，就可以挑了，一长大， ...

谢谢，我再试试！
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3楼2012-07-11 22:20:48
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-11 13:49:05
就是说你的菌里，可能有2个以上载体，或者一个菌落，其实混有2种以上菌。
要不你转化的时候少放点载体？或者涂板子的时候涂开些？板子用大些的？不要等菌长的很大才去挑，只要肉眼看得见菌斑，就可以挑了，一长大，有时候是几个菌斑混着的。
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2楼2012-07-11 11:09:40
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shenye.judy at 2012-07-11 11:09:40
就是说你的菌里，可能有2个以上载体，或者一个菌落，其实混有2种以上菌。
要不你转化的时候少放点载体？或者涂板子的时候涂开些？板子用大些的？不要等菌长的很大才去挑，只要肉眼看得见菌斑，就可以挑了，一长大， ...

你是说菌里可能同时含有空载体和含有目的基因的载体吗，想问下质粒不是有不相溶性的吗？
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4楼2012-07-12 21:54:04
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-13 16:10:07
你的这种问题，很常见的，菌落pcr的假阳性很高，要保证pcr的真阳性，必须从你的目的载体上设计引物进行pcr，然后进行目的片段的pcr，双重筛选。
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coasttocoast。
5楼2012-07-12 22:16:28
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