24小时热门版块排行榜    

查看: 2420  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

dongyan08

木虫 (正式写手)

[交流] 双酶切啥都没有? 已有5人参与

麻烦各位帮我分析下我的双酶切后跑胶什么都没有哦!我的是PCR产物回收的片段,设计了保护碱基,用的是HindIII和KpnI酶切,酶切过夜,之后跑胶什么都没有,只有MARKER,切4个小时后跑胶也是什么都没有,同样的酶用来切质粒倒是能跑出比较亮的条带,PCR产物酶切之前跑胶还是挺亮的但酶切之后就什么都没有,也不知道为什么,感觉酶应该没有问题。到底是什么原因呢?不敢切下去了,麻烦各位高手指教指教。谢谢!
     酶都是TAKARA的,新买的,能切开质粒,应该没问题吧。而且PCR时引物还加了保护碱基。

[ Last edited by dongyan08 on 2012-7-9 at 21:18 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongyan08

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by hzlatqh at 2012-07-10 22:12:58
嗯 推测也是PCR回收试剂盒溶液有DNA酶污染,下回做酶切的时候可以做个不加内切酶的对照看看。

回收以后跑胶检测有挺亮的带的,应该不是回收的问题吧
8楼2012-07-14 00:08:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

wangcongxs

银虫 (著名写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
时间还是长了?我用HPa2/Msp1和EcoR1分别做双酶切,切的是DNA模板,也经常跑胶后什么都没有……纠结啊
做最好的自己
2楼2012-07-10 09:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongyan08

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by lw19850128 at 2012-07-10 12:35:26
回收有问题不?

回收没有问题,回收完了之后还跑了胶,挺亮的
4楼2012-07-10 14:29:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tyw2623

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-11 13:37:01
目前夏天   天气热  建议楼主所有的试管 枪头要灭菌,防止有外源DNA酶污染,  pcr产物回收相关试剂盒保证没有外源酶污染   尤其是最后一步的洗脱溶液 一定要保证无污染。。。。祝顺利
水遁
5楼2012-07-10 19:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +8 wangyl_123 2026-10-10 12/600 2026-10-13 20:40 by Merryya
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +9 Isak0320 2026-10-12 13/650 2026-10-13 11:57 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +4 好运来~9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费,对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见