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tzaixmc

木虫 (正式写手)

[求助] 细菌基因组的部分酶切

目前想要用质粒pUCM-T建一个细菌基因组的质粒文库。在用Sau3A Ⅰ部分酶切基因组时有几个问题。
1、部分酶切是指的是基因组中所有酶切位点其中一部分被切开,而不是一部分基因组DNA被切开吧?
2、如何判断基因组是部分酶切而不是完全酶切?就是说电泳时在所需要的片段位置有弥散的DNA,但是基因组DNA还是有很均一的条带。也就是一部分基因组DNA被切开,这样算是部分酶切吗?如果只有弥散的DNA但没有基因组DNA的主带,这样的情况下如何判断是部分酶切还是完全酶切?完全酶切的条带也是弥散的吧?
希望高手指点一下,谢谢!
谁能传一张部分酶切效果很好的电泳图看看,借鉴一下。送5个金币。

[ Last edited by tzaixmc on 2012-7-9 at 11:06 ]
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tzaixmc

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-07-11 16:50:43
我构建过亚克隆文库,基本原理和你的一样,部分酶切指的也就是随机酶切,使基因组DNA形成从大到小都有的大小不一片段,酶切效果较好的情况是指不存在单一的主带,成弥散带,然后你把你需要的片段大小范围内的DNA回收 ...

那你指的酶切效果较好的情况和完全酶切在电泳图中有什么区别吗?
7楼2012-07-12 08:22:02
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tzaixmc

木虫 (正式写手)

高人出来指点一下啊,谢谢
2楼2012-07-09 16:04:34
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tzaixmc: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2012-07-19 11:06:45
我没构建过文库,但是构建文库应该是部分酶切后回收目的大小区域的DNA吧,所以我觉得第一个问题应该是第一种情况,但是有部分DNA没被切开也没关系;第二个问题,不管怎么样带型肯定是弥散的
科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
4楼2012-07-11 08:34:42
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cccsnd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们做过CELL1酶的酶切,部分酶切我的理解是基因组被切开,分成两个(我们试验中)或以上的片段~~~个人见解
真诚待人,真诚生活!
5楼2012-07-11 16:09:39
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