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tzaixmc木虫 (正式写手)
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[求助]
细菌基因组的部分酶切
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目前想要用质粒pUCM-T建一个细菌基因组的质粒文库。在用Sau3A Ⅰ部分酶切基因组时有几个问题。 1、部分酶切是指的是基因组中所有酶切位点其中一部分被切开，而不是一部分基因组DNA被切开吧？ 2、如何判断基因组是部分酶切而不是完全酶切？就是说电泳时在所需要的片段位置有弥散的DNA，但是基因组DNA还是有很均一的条带。也就是一部分基因组DNA被切开，这样算是部分酶切吗？如果只有弥散的DNA但没有基因组DNA的主带，这样的情况下如何判断是部分酶切还是完全酶切？完全酶切的条带也是弥散的吧？ 希望高手指点一下，谢谢! 谁能传一张部分酶切效果很好的电泳图看看，借鉴一下。送5个金币。 [ Last edited by tzaixmc on 2012-7-9 at 11:06 ] |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
scelab: 金币+3, good 2012-07-11 20:28:21
tzaixmc: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 顺变再问一个问题，我发现我的基因组DNA能被EcoR1酶切开，但是Sau3A1完全切不动DNA。但是这两个酶都能酶切Takara的质检用λ DNA，说明酶没什么问题。但是Sau3A1按推荐体系酶切3h还是切不动我的基因组DNA。这是什么个情况啊？ 2012-07-19 11:06:17
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scelab: 金币+3, good 2012-07-11 20:28:21
tzaixmc: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 顺变再问一个问题，我发现我的基因组DNA能被EcoR1酶切开，但是Sau3A1完全切不动DNA。但是这两个酶都能酶切Takara的质检用λ DNA，说明酶没什么问题。但是Sau3A1按推荐体系酶切3h还是切不动我的基因组DNA。这是什么个情况啊？ 2012-07-19 11:06:17
| 我构建过亚克隆文库，基本原理和你的一样，部分酶切指的也就是随机酶切，使基因组DNA形成从大到小都有的大小不一片段，酶切效果较好的情况是指不存在单一的主带，成弥散带，然后你把你需要的片段大小范围内的DNA回收回来就可 |
6楼2012-07-11 16:50:43
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