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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR失败求高手指点！！！！！！！！！
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lpsyz007

新虫 (小有名气)

[求助] PCR失败求高手指点！！！！！！！！！

PCR DNA模板是埃芥 用的正反引物是ARA10-1F和ARA10-1R但是没有成功 是不是引物和模板不契合，还有就是我们离心DNA模板让他从酒精分离没有任何沉淀，可能是模板的问题？希望高手解答下！！！！THX
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1楼 2012-07-05 12:50:15
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-05 20:23:23
从lz给的信息中基本没法推断是什么原因。
一般PCR无外乎就是引物、模板和条件，这三个因素相互排除下即可。模板可以用内参检测。引物的话如果是用别人的或者是通用引物，一般问题不大。条件可能是最麻烦的，一般先做个梯度看下，能不能出带，如果能出带，那么说明引物和模板都ok，后面只是优化了。
一次PCR失败很正常，尤其是照搬别人的条件时，适当调整下，可能会有惊喜。
希望能对lz有所帮助。
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3楼2012-07-05 16:21:19
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lpsyz007: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-07-07 10:17:35
首先弱弱的问下楼主正反引物ARA10-1F和ARA10-1R是啥？
第二个离心DNA模板让他从酒精分离，有时候肉眼是看不到DNA沉淀的，这个我提基因组的时候也遇到过，不过没关系，里面有DNA的，可能量比较少，最后用TE或者水定容体系小一点.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-07-05 14:39:23
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lpsyz007

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanghd2826 at 2012-07-05 16:21:19
从lz给的信息中基本没法推断是什么原因。
一般PCR无外乎就是引物、模板和条件，这三个因素相互排除下即可。模板可以用内参检测。引物的话如果是用别人的或者是通用引物，一般问题不大。条件可能是最麻烦的，一般先 ...

谢谢提醒
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4楼2012-07-07 10:18:57
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