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清木ing

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最后一步的buffer可以加点低浓度的尿素,比如0.2M的
11楼2012-09-24 10:28:40
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appletree-

新虫 (小有名气)

您好!我最近要做包涵体蛋白复性,您能把有关蛋白复性的paper发给我吗?感谢!
12楼2013-05-21 19:30:51
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

包涵体的形成很多是由于大肠系统无法形成二硫键而产生的。建议去uniprot查一下你的蛋白有没有链内二硫键,如果有的话请尝试用氧化还原体系复性,这个百度就知道的。
13楼2013-05-22 17:28:57
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大肠表达系统无法形成链内二硫键,复性的时候应该先查一下你的蛋白有没有链内二硫键,可以去uniprot查一下,如果有的话就要加入氧化还原体系透析(gsh:gssh),再一个,透析的浓度不要高了,否则极容易聚集沉淀,防止聚集沉淀,500mM精氨酸是不错的,尤其是最后去除尿素的一步。
还有就是,查一下你的蛋白里面的鼓励半管氨酸,如果有的话,建议加入2mmdtt。谢谢
14楼2013-05-23 09:18:48
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

鼓励半管氨酸=孤立半胱氨酸
15楼2013-05-23 09:23:43
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以用大分子量的可溶标签啊,比如gst mbp ,以及tf载体的啦,15度过夜摇的啦。
16楼2013-05-24 10:38:53
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高大上小天鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by bioleo at 2012-08-22 14:29:04
复兴过程蛋白沉淀很常见,建议你试试柱上复性,洗脱后可以添加表面活性剂并0.2膜过滤

你好请问柱上复性怎么操作呢?
17楼2015-09-18 14:46:51
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