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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何解决包涵体复性沉淀问题？
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清木ing

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最后一步的buffer可以加点低浓度的尿素，比如0.2M的
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11楼2012-09-24 10:28:40
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appletree-

新虫 (小有名气)
您好！我最近要做包涵体蛋白复性，您能把有关蛋白复性的paper发给我吗？感谢！
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12楼2013-05-21 19:30:51
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

包涵体的形成很多是由于大肠系统无法形成二硫键而产生的。建议去uniprot查一下你的蛋白有没有链内二硫键，如果有的话请尝试用氧化还原体系复性，这个百度就知道的。
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13楼2013-05-22 17:28:57
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

大肠表达系统无法形成链内二硫键，复性的时候应该先查一下你的蛋白有没有链内二硫键，可以去uniprot查一下，如果有的话就要加入氧化还原体系透析（gsh：gssh），再一个，透析的浓度不要高了，否则极容易聚集沉淀，防止聚集沉淀，500mM精氨酸是不错的，尤其是最后去除尿素的一步。
还有就是，查一下你的蛋白里面的鼓励半管氨酸，如果有的话，建议加入2mmdtt。谢谢
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14楼2013-05-23 09:18:48
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

鼓励半管氨酸=孤立半胱氨酸
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15楼2013-05-23 09:23:43
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edoz1986

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

可以用大分子量的可溶标签啊，比如gst mbp ，以及tf载体的啦，15度过夜摇的啦。
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16楼2013-05-24 10:38:53
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高大上小天鹅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by bioleo at 2012-08-22 14:29:04
复兴过程蛋白沉淀很常见，建议你试试柱上复性，洗脱后可以添加表面活性剂并0.2膜过滤

你好请问柱上复性怎么操作呢？
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17楼2015-09-18 14:46:51
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