应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用天根琼脂糖回收试剂盒中的eb洗脱，会影响后续的连接转换，测序吗？
251/1返回列表
查看: 5049  |  回复: 24
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

eesing

金虫 (正式写手)

[交流] 用天根琼脂糖回收试剂盒中的eb洗脱，会影响后续的连接转换，测序吗？

如题，载体为takara的pmd18-T，最近总长阳性菌很少，且概率低，谢谢各位了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-06-30 11:58:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wanghuaish

金虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
You\'d better elute by ddH2O, the Qiagen gel kit EB buffer just is Tris Buffer(TE buffer), I think it could better for store DNA, but not good for sequence and ligation. But may be ddH2O elute solution could affect the result of concentration of OD.
Hope could help a bit!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2012-06-30 22:13:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuejunwang

木虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
理论上不影响，如果怀疑可以用超纯水直接洗脱啊，或将EB稀释几倍
赞一下 回复此楼
9楼2012-06-30 14:18:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syn1985

木虫 (正式写手)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
我一般不用他自带的洗脱液 因为用这个洗脱液洗脱的PCR产物直接送公司测序会测不出来 不够我也见过他们直接用的 好像也没多大问题  我觉得连不上最大问题是浓度
赞一下 回复此楼
13楼2012-06-30 15:06:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinfangli

铜虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
我们也用过这个试剂盒，都没人用过里面的洗脱液，都用超纯水，对后续试验没得影响
赞一下 回复此楼
15楼2012-06-30 16:10:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

robert-RBT

木虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
我用过，不影响链接和转化。不知道是否影响测序。
赞一下 回复此楼
17楼2012-07-01 04:50:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jimmy7633

木虫 (著名写手)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
用胶回收产物测序？我还没试过，最好还是用水溶解。
赞一下 回复此楼
18楼2012-07-01 10:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

675250244

银虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
会有一点影响，建议用灭菌水洗脱，
赞一下 回复此楼
19楼2012-07-01 12:31:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
eesing(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-02 13:40:14
应该不会吧，虽然我们用的不是天根的胶回收试剂盒，但是貌似最后一步用的也是试剂盒自带的洗脱液，没出现过影响后面连接的情况，楼主是不是检查一下回收效率，估计回收后浓度太低， 可以减少洗脱液量，我们那个试剂盒最后一步洗脱液建议量为30-50Ul，我一般都加35的.
祝楼主好运.
赞一下 回复此楼
21楼2012-07-01 22:13:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

肥宝

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一直用超纯水洗脱，洗2遍
赞一下 回复此楼
22楼2012-07-02 16:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最好不要用自带的EB buffer，好像上面提到了对连接和测序反应有影响。
赞一下 回复此楼
23楼2012-07-03 11:20:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对转化连接应该是没有什么影响的，测序的话，最好是用超纯水洗脱。
赞一下 回复此楼
24楼2012-07-03 15:26:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sd3824289

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主最后一步最好用dd H2O来回收，用EB对后续的链接测序都会有影响的。如果后续不做链接的话，EB回收没有问题，强调一点，如果用水做回收的话，水的pH最好在7.0-7.5之间，否则会影响回收效率！
赞一下 回复此楼
25楼2012-07-03 15:36:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
qingheyouyou2楼
2012-06-30 12:08   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
tangbohejin3楼
2012-06-30 12:34   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
zongpengfei20084楼
2012-06-30 12:50   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
neu2345楼
2012-06-30 12:56   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
wuge4156楼
2012-06-30 13:00   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
goingabroad7楼
2012-06-30 13:08   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
wendy38楼
2012-06-30 13:59   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
小花82110楼
2012-06-30 14:32   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
niu.bi11楼
2012-06-30 14:44   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
strive12312312楼
2012-06-30 14:57   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
love萌201014楼
2012-06-30 15:10   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
yingying158820楼
2012-07-01 21:51   回复  
eesing(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 eesing 的主题更新
251/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭