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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 用天根琼脂糖回收试剂盒中的eb洗脱，会影响后续的连接转换，测序吗？
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eesing

金虫 (正式写手)

[交流] 用天根琼脂糖回收试剂盒中的eb洗脱，会影响后续的连接转换，测序吗？

如题，载体为takara的pmd18-T，最近总长阳性菌很少，且概率低，谢谢各位了
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1楼 2012-06-30 11:58:47
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wanghuaish

金虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
You\'d better elute by ddH2O, the Qiagen gel kit EB buffer just is Tris Buffer(TE buffer), I think it could better for store DNA, but not good for sequence and ligation. But may be ddH2O elute solution could affect the result of concentration of OD.
Hope could help a bit!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2012-06-30 22:13:10
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xuejunwang

木虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
理论上不影响，如果怀疑可以用超纯水直接洗脱啊，或将EB稀释几倍
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9楼2012-06-30 14:18:59
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syn1985

木虫 (正式写手)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
我一般不用他自带的洗脱液 因为用这个洗脱液洗脱的PCR产物直接送公司测序会测不出来 不够我也见过他们直接用的 好像也没多大问题  我觉得连不上最大问题是浓度
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13楼2012-06-30 15:06:11
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jinfangli

铜虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
我们也用过这个试剂盒，都没人用过里面的洗脱液，都用超纯水，对后续试验没得影响
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15楼2012-06-30 16:10:12
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robert-RBT

木虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
我用过，不影响链接和转化。不知道是否影响测序。
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17楼2012-07-01 04:50:26
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jimmy7633

木虫 (著名写手)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
用胶回收产物测序？我还没试过，最好还是用水溶解。
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18楼2012-07-01 10:54:44
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675250244

银虫 (小有名气)
★
eesing(金币+1): 谢谢参与
会有一点影响，建议用灭菌水洗脱，
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19楼2012-07-01 12:31:40
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Marado

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
eesing(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-02 13:40:14
应该不会吧，虽然我们用的不是天根的胶回收试剂盒，但是貌似最后一步用的也是试剂盒自带的洗脱液，没出现过影响后面连接的情况，楼主是不是检查一下回收效率，估计回收后浓度太低， 可以减少洗脱液量，我们那个试剂盒最后一步洗脱液建议量为30-50Ul，我一般都加35的.
祝楼主好运.
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21楼2012-07-01 22:13:26
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肥宝

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我一直用超纯水洗脱，洗2遍
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22楼2012-07-02 16:01:26
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最好不要用自带的EB buffer，好像上面提到了对连接和测序反应有影响。
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23楼2012-07-03 11:20:51
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gelois

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
对转化连接应该是没有什么影响的，测序的话，最好是用超纯水洗脱。
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24楼2012-07-03 15:26:01
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sd3824289

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主最后一步最好用dd H2O来回收，用EB对后续的链接测序都会有影响的。如果后续不做链接的话，EB回收没有问题，强调一点，如果用水做回收的话，水的pH最好在7.0-7.5之间，否则会影响回收效率！
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25楼2012-07-03 15:36:46
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qingheyouyou2楼
2012-06-30 12:08   回复  
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tangbohejin3楼
2012-06-30 12:34   回复  
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zongpengfei20084楼
2012-06-30 12:50   回复  
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neu2345楼
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wuge4156楼
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goingabroad7楼
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wendy38楼
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小花82110楼
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niu.bi11楼
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strive12312312楼
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love萌201014楼
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yingying158820楼
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