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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 切胶回收后片段不单一的原因
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yingyangyang

木虫 (正式写手)

[求助] 切胶回收后片段不单一的原因 已有1人参与

我用2%琼脂糖凝胶跑电泳，切胶回收300-400bp的片段，然后用胶纯化试剂盒纯化回收的片段，再跑个电泳，结果出现了两条带，有300-400bp片段和400bp以上一条带！做了多次都这样，不知道为什么？？？确定准确的切300-400的片段，不可能切刀400以上的，但是多次做都是这样的结果！ 为什么呢？？试剂盒也没有污染！求解。。。以下是切胶回收后的电泳图！！有两条带！


[ Last edited by yingyangyang on 2012-6-25 at 12:48 ]
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1楼 2012-06-25 12:47:18
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lrrnd

木虫 (正式写手)
你好，我也回收300~400bp的片段，用的是Qigen的回收试剂盒，用最大的加样孔，加300ul的PCR产物，感觉量很多了吧。我也是跑2%的琼脂糖凝胶电泳。可是回收后跑胶检测不到条带，只有Marker，没有任何其他带。回收的DNA做PCR可以。
请问，你是怎么回收的，而且你回收的目的带还比较多了。用的加样孔是多大的？谢谢了。
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11楼2013-05-20 16:49:20
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 很热心，很中肯的建议 2012-06-25 13:48:01
可能原因：
1、试剂盒有污染。
2、回收试剂有问题.
解决办法：
1、不用试剂盒回收纯化，用自己配制的试剂。
2、做二次回收。
3、将胶浓度再加大，跑胶时间加长，尽量让条带分得开一些。
4、换一种marker，尽量使切胶的位置更准确些。
5、实在没办法就把所有用到的试剂都重新配制。
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
2楼2012-06-25 13:23:45
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windsor2011

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是回收条带的纯度不高，可尝试一下在回收时将胶切的更碎一些，并加大溶胶液的量，也许效果会好一些
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只要功夫深铁杵磨成针
3楼2012-06-26 10:44:49
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yingyangyang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dingxiuying at 2012-06-25 13:23:45
可能原因：
1、试剂盒有污染。
2、回收试剂有问题.
解决办法：
1、不用试剂盒回收纯化，用自己配制的试剂。
2、做二次回收。
3、将胶浓度再加大，跑胶时间加长，尽量让条带分得开一些。
4、换一种marker，尽 ...

胶纯化的试剂怎么配置呢？有具体的配方吗？没有自己配过呢！
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4楼2012-06-27 18:22:14
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