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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：Xho 1 单酶切 载体连接
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匿名

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1楼2012-06-25 00:30:53
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jqq1985

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

载体能切开说明酶没有问题，涂板子不长说明去磷酸化没有问题。载体，酶没有问题，那问题只可能是出在片段上，是不是没加保护碱基还是其他什么原因没切开？另外片段的量多点好，不用管那个1:10的比例，我都是100ul PCR体系的产物全部用来做连接。
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13楼2012-06-28 13:57:07
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR产物连T载体，再切下来，回收，再连接。载体：2ul(约0.03pmol)，片段：4ul(约0.003pmol)，这个mol比到1:3么？加大片段的量啊
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相信自己
2楼2012-06-25 08:37:29
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匿名

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3楼2012-06-25 12:59:51
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陈朵朵

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-25 13:46:38
之前我们实验室做简单的T载体连接，做了半个月也一直连不上，后来把T载体换了新的，T4连接酶也换了之后就连上了。你看是不是你们的T载体污染了，一般T载体连接效率是很高的，跟mol比没有太大的关系，1:3 到1:10基本上没什么区别。
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4楼2012-06-25 13:04:44
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