| 查看: 3621 | 回复: 9 | ||
| 本帖产生 1 个 ACI ，点击这里进行查看 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
wj_happiness金虫 (小有名气)
|
[求助]
请问，我要用HILIC柱定量检测两种强极性，水溶性的赖氨酸衍生物，改选用什么流动相呢
|
|
|
我要用LC-MS定量检测两种赖氨酸衍生物，都是强极性，水溶。文献中都是用C18柱，九氟戊酸和乙腈作为流动相的。现在发现九氟戊酸会残留在机器中，上次waters的工程师过来也没完全搞定，到现在都一个多月了机器中还有。 查了资料以后，发现HILIC柱适合分离强极性水溶性物质。可是我用10mM乙酸铵和乙腈作为流动相以后，效果不好，总离子图上两种物质分不开。求助给位，我该怎么办好呢？   |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然评审意见
已经有12人回复
-
国自然面上复盘~欢迎讨论
已经有14人回复
-
系统查不到
已经有11人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有18人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有12人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有3人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有8人回复
-
基金不中，共勉
已经有11人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有9人回复
-
2026年叶企孙基金
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 样品如何前处理，过柱如何控制流速、不漏液？
已经有12人回复
- 过柱子，湿法上样
已经有21人回复
- 大家推荐个水溶性的强还原剂
已经有12人回复
- 用GC-MS做定量分析为什么结果起伏非常大？好着急呜呜。。。
已经有11人回复
- 用Hoechst33342/PI 双染做流式，居然只检测到坏死细胞，这是个什么状况
已经有12人回复
- 求过柱指点迷津
已经有32人回复
- 总离子色谱图许多组分没检测出的原因
已经有7人回复
- 材料加工工艺过程的检测与控制.pdf
已经有88人回复
- 残留溶剂的检测
已经有5人回复
- C18SPE柱 能分离提纯脂肪酸吗？
已经有7人回复
- 关于产物过柱子的一个问题
已经有6人回复
- 紫外末端吸收且水溶性极差的药物制成固体分散体后溶出度的测定困难
已经有6人回复
- 手性柱的问题！
已经有4人回复
- 原料极性大不溶乙醚，怎么跟正丁基锂反应啊
已经有32人回复
- 相对定量荧光PCR结果分析中的SD如何计算？
已经有7人回复
- 【求助】样品极性较强，该用什么色谱柱检测？
已经有11人回复
wj_happiness
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1032.1
- 散金: 28
- 红花: 1
- 帖子: 58
- 在线: 36.2小时
- 虫号: 1106873
- 注册: 2010-09-24
- 专业: 食品科学基础
3楼2012-06-24 09:01:46
ABCzero
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 12906.9
- 红花: 1
- 帖子: 465
- 在线: 284.5小时
- 虫号: 239997
- 注册: 2006-04-07
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
2楼2012-06-24 08:57:36
guevara1967
铁杆木虫 (著名写手)
- ACI: 18
- 应助: 453 (硕士)
- 贵宾: 0.388
- 金币: 8295.5
- 散金: 896
- 红花: 64
- 沙发: 23
- 帖子: 1604
- 在线: 335.1小时
- 虫号: 1565366
- 注册: 2012-01-05
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
4楼2012-06-24 15:22:41
guevara1967
铁杆木虫 (著名写手)
- ACI: 18
- 应助: 453 (硕士)
- 贵宾: 0.388
- 金币: 8295.5
- 散金: 896
- 红花: 64
- 沙发: 23
- 帖子: 1604
- 在线: 335.1小时
- 虫号: 1565366
- 注册: 2012-01-05
- 性别: GG
- 专业: 质谱分析
【答案】应助回帖
|
分享：浅谈亲水作用色谱（HILIC）及其与质谱联用技术 亲水作用色谱(HILIC)是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点;比较了HILIC和反相色谱(RPLC)的选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。 1. HILIC的概念 亲水色谱(HILIC)是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱(ESI-MS)的灵敏度。 2. HILIC的分离机制 HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：(1)分配机理(2)离子交换(3)偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。 3.HILIC影响保留的主要因素 普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。 影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。在HILIC分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图1所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。 [attach]3243[/attach] Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid. 4. HILIC与RP-HPLC的比较 传统的反相色谱(RPLC)对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，比如固定相的反浸润和ESI-MS灵敏度的下降。 HILIC正好可以解决这些问题，它提供了一种与传统RPLC互补的保留方式，能够使在RPLC上保留较弱或没有保留的物质在HILIC柱上提供合适的保留，如图2所示： [attach]3244[/attach] Figure 2: Chromatograms comparing the retention of allantoin on Atlantis HILIC Silica and Atlantis dC18 columns. (a) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis dC18; mobile phase: 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows no retention (k =0) of allantoin. (b) Column: 50 mm×4.6 mm, 3-μm dp Atlantis HILIC Silica; mobile phase: 95:5 (v/v) acetonitrile–water containing 10 mM ammonium formate, pH 3; Shows retention (k =1) of allantoin. 另外，HILIC柱上的洗脱顺序与RPLC柱上的正好相反，极性较大的物质先出峰，极性较小的物质后出峰。如图3所示： [attach]3245[/attach] Figure 3. Comparison of ESI+MS response using HILIC and RP conditions. SIR channels of acetylcholine (m/z 146.2) and choline (m/z 103.9); Columns: 100 mm×2.1 mm, 1.7μm (A) ACQUITY UPLC BEH C18 (B) ACQUITY UPLC BEH HILIC. Peaks: 1 = acetylcholine, 2 = choline 5.HILIC与质谱技术联用 HILIC可为强极性和强亲水性的化合物提供合适的保留。通过优化多个色谱参数，有利于实现目标组分和基质中干扰物质的分离，从而降低基质效应的影响;而含有高比例水溶性有机相的流动相又有利于提高质谱离子化效率，进而提高质谱分析的灵敏度。 质谱响应在某种程度上是取决于流动相中有机相的比例。采用ESI源时，毛细管中离子化的过程类似于一个电泳过程。由于毛细管被加高压，形成带电液滴。溶剂蒸发，离子向液滴表面移动，当液滴表面电荷产生的库仑排斥力与液滴表面的张力大致相等时，液滴会分裂成更小的液滴，对于半径<10nm的液滴, 液滴表面形成的电场足够强，电荷的排斥作用最终导致部分离子从液滴表面蒸发出来，形成了气相离子。而有机相的表面张力比水相的表面张力小得多。因此，在相同的条件下，流动相中有机相的比例越高，质谱的响应越高。从图4可以看出，在HILIC柱上的响应比在RPLC柱上的响应高出十倍左右。 [attach]3246[/attach] Figure 4. Chromatograms comparing the retention and MS response of an alyte on C18 column and HILIC column. (A) Column: 2.1×50mm, 3 m Inertsil ODS-3; mobile phase: methanol-water containing 0.2% formic acid (15:85, v/v) (B) Column: 2.1×50mm, 1.7 m ACQUITY UPLC BEH HILIC; mobile phase: methanol-water containing 0.2% formic acid (85:15, v/v) 6. HILIC柱的使用 (1)初次使用HILIC柱时，应采用50倍柱体积的乙腈-水(50:50)平衡，在进第一针前，应用初始流动相平衡20倍的柱体积。 (2)HILIC柱冲柱子时，采用的是乙腈-水(50:50)来洗去极性物质。如果解决不了问题，可以使用乙腈-水 (5:95) 来冲柱子。长时间不用时，将柱子保存在乙腈-水(95:5)中。 (3)要保证流动相中至少40%的有机相。流动相中使用添加剂时，醋酸铵、甲酸铵的重现性优于乙酸和甲酸。如必须使用甲酸等，0.2%优于0.1%，不要使用磷酸。 (4)水是最强的洗脱溶剂，所以强洗和弱洗溶剂与反相系统的正好相反：弱洗是初始流动相，即高比例的有机相。并且进样溶剂最好是100%的有机相。 转自http://bbs.antpedia.com/thread-23684-1-1.html |
5楼2012-06-24 15:25:44
10