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xiajuan9

新虫 (小有名气)

[交流] 链霉菌接合转移 已有7人参与

有哪位前辈知道链霉菌接合转移最关键的是什么?本人做链霉菌,构建好了质粒从大肠杆菌ET12567/pUZ8002带质粒的菌往链霉菌转化,总转不进去,有没有别的更好的方法?该注意什么呢?
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xiajuan9

新虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 987212fz at 2013-05-21 22:05:17
楼主,不知道你把个问题解决了没有,我是刚刚接触这个结合转移,结果做了快一个学期,结合转移的效率还是很低,不知道你有什么思路能帮我一下不

我做了一年,没再能重复出来后,放弃了。试过不同温度热激42-50℃。热激后复苏6h。混匀后涂板。效率很低,因为选择的板ISP4并不是最适合我做的链霉菌生长的。它的最适培养基不适合做接合转移。总之没做出来,祝你好运啊。。。
12楼2013-05-24 16:28:19
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doriscc

金虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你应该把你做的具体步骤说的详细点,这样可以对症下药。一般整合型的是比较容易的,同源重组的效率会低很多。
2楼2012-06-23 21:14:56
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小小亚杰

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
理论上这样做就行了,但根据不同的链霉菌,接合转移程度不同。
3楼2012-06-24 15:55:07
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以先尝试pSET152载体 ,进行摸索,建立遗传转化体系。一般链霉菌相对容易接合转移...
4楼2012-06-25 06:14:04
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