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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

[求助] 样品如何前处理,过柱如何控制流速、不漏液?

测定复方制剂中总黄酮,杂质有些多,如何处理?
用聚酰胺粉还是D101型大孔树脂?这两种填料主要是吸附什么物质,如何洗脱杂质?
过柱时如何确定洗脱剂的量,是否洗脱完杂质或要的组分?
还有过柱子时,老从活塞处漏液,涂了凡士林,也不咋管用,连凡士林也流到了收集器中,咋办?流速也不好控制,看资料大部分要求1mL/min,可做时稍微一拧活塞,不是流得太快就是不流,两个极端呀!洗脱完后,能不能用洗耳球吹一吹柱子,让洗脱剂完全流出?

望有经验之士指点一二,感激不尽!
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去做自己想做的
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

引用回帖:
8楼: Originally posted by heying136 at 2012-06-19 08:42:14
首先你可能没明白聚酰胺的吸附原理,它对特定的官能团有吸附力,逐渐加大醇浓度,洗脱力就加强,聚酰胺就吸附不住了,就洗脱下来了,所以如果是黄酮的话应该不存在一开始就被洗脱的问题。
第二,上样应该是水溶液 ...

再次感谢您,很专业,我就是一菜鸟!
按照标准的方法来操作,其中的很多原理不了解,所以没法选择更优化的条件。

上样一定要是水溶液吗?我要测定是复方制剂中的总黄酮,黄酮类化合物的极性各不相同,如果我用甲醇提取,蒸干,用水溶解,会不会有些甲醇提取物无法溶于水,有损失呢?
去做自己想做的
10楼2012-06-20 00:40:45
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heying136

禁虫 (小有名气)


感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-06-17 15:52:04
本帖内容被屏蔽

2楼2012-06-16 11:09:27
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pdl0911

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-06-17 15:52:14
yilishanshan: 金币+2, ★★★很有帮助, 感谢乐于分享您的经验 2012-06-20 00:42:54
我用过D101 水洗部分能除掉 糖 核苷 之类的 对黄酮 酚酸的吸附很好。

流速过慢的话可能是你的样品把柱头给堵了。。
lz可以把活塞擦干再土凡士林,这样不会滑吧??

至于流速,我建议你用蠕动泵啊~可以控制流速。
我要努力~
3楼2012-06-17 15:17:32
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

大星星

引用回帖:
2楼: Originally posted by heying136 at 2012-06-16 11:09:27
建议用聚酰胺,聚酰胺树脂主要用来分黄酮类物质的,对黄酮有较好的吸附。上样后先用水洗脱掉杂质,依次用不同浓度的乙醇洗脱,慢慢增加乙醇的比例,例如30%、50%、70%、100%,比例可以自己定,分段收集。看是不是洗 ...

谢谢分享您的经验
我的样品是用50%甲醇提取的,有效成分中含有水溶性成分,上了聚酰胺柱,一开始就用水洗脱杂质,不会把我要的东西洗掉吗?

可以考虑用硅胶管,应该会比活塞好些,但我的方法是首先用氯仿、石油醚等溶剂洗脱杂质,再用甲醇洗脱黄酮,不知氯仿等溶剂是否会溶解腐蚀硅胶管?
哎哟,最要命的是,我们实验室都是带活塞的层析柱!
是,用过量的溶剂洗脱,就应该不用吹嘛!
去做自己想做的
4楼2012-06-18 22:26:31
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