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蝈蝈1988

木虫 (小有名气)

[求助] pcr跑胶图

求教，琼脂糖凝胶电泳从左到右一次是1,2，3,4对引物各重复两次，然后是水的空白对照，最后是2000的marker，marker最亮的是750bp，我需要的是1,2号引物的380bp左右片段和3,4号引物420bp左右片段。这个条带太亮的3号能用来回收测序吗？？
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心态决定命运
1楼 2012-06-14 17:20:37
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iquwtony

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 鼓励 2012-06-14 18:46:36
蝈蝈1988: 金币+1, ★有帮助, 谢谢啦，其实是1,1,2,2,3,3,4,4,您好像看错了。。。。 2012-06-14 22:29:18
12号引物可以切胶回收，34号条带不是很亮
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研究就要有学习的精神
2楼2012-06-14 17:47:34
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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 同意 2012-06-14 18:46:49
1949stone: 金币+1 2012-06-14 18:46:57
蝈蝈1988: 金币+2, 谢谢啦 2012-06-14 22:28:07
这个做过才知道。DNA浓度低，可以先转化到大肠杆菌中，再测序。
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日拱一卒，功不唐捐
3楼2012-06-14 18:34:37
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
蝈蝈1988: 金币+3, ★有帮助 2012-06-19 15:18:56
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-20 15:23:16
3#没有问题，但是你回收测序的目的是什么？你是用来构建载体还是仅仅确定引物对应的基因序列？
如果是构建载体，直接酶切连接到终载体里面。再测序验证。
1# 2# 4#都算没有P出来的。

建议引物要重新分析下看看。
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4楼2012-06-19 12:39:07
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蝈蝈1988

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuzhiming at 2012-06-19 12:39:07
3#没有问题，但是你回收测序的目的是什么？你是用来构建载体还是仅仅确定引物对应的基因序列？
如果是构建载体，直接酶切连接到终载体里面。再测序验证。
1# 2# 4#都算没有P出来的。

建议引物要重新分析下看看 ...

3号是下游，嘿嘿。。。。。。下游有目的片段大小的东西，已经切胶回收了。上游没有出来。。。。。
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心态决定命运
5楼2012-06-19 15:16:41
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
蝈蝈1988: 金币+14, ★有帮助 2012-09-24 15:08:18
好的。先别忙测序，先-20C冻存，待上游PCR出来后，再一起做模板把它PCR出来。再连入载体测序。
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6楼2012-06-19 15:37:45
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蝈蝈1988

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuzhiming at 2012-06-19 15:37:45
好的。先别忙测序，先-20C冻存，待上游PCR出来后，再一起做模板把它PCR出来。再连入载体测序。

好的！
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心态决定命运
7楼2012-06-19 20:22:17
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