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guoyongyue

新虫 (初入文坛)

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[求助] DEAE-52纤维素柱求助已有2人参与

现在在做食用菌子实体多糖的分离纯化，我用的是DEAE-52的纤维素柱，用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脱，1.25ml/min，上样量是1mg/ml 的多糖10ml，每管收集5ml，过了两次，也有峰，但是纯品太少，没办法富集，还想拿到纯品，怎么办呢？

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1楼2012-06-13 10:09:29

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qingxiayuan

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【答案】应助回帖

不知道你的柱子是多大的，就你描述的看来上样量太小了。我们的柱子一般的2.6x30,2.6X50,2.6x60的，上样量可以达到几百毫克。
多糖难溶解会漂浮的问题，我们也遇到过。我的多糖也比较黏，所以上样体积就相对大些，一般会在20-30ml之间，DEAE是吸附解吸附的过程，上样体积大些是没有问题的。溶解也需要加热搅拌什么的。黏的多糖用DEAE-纤维素是比较合适的，如果是DEAE-F F会出现堵的现象。至于你说的漂浮情况，不知道你是怎么上样的。我一般是去掉胶面的流动相再加入多糖，等多糖安全进入胶里了，再在胶面加上水开始冲洗收集。
最后是你说的有峰，但纯品太少的问题。主要是上样太少了，也得看你稀释多少倍来测的。