24小时热门版块排行榜    

查看: 5954  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)

[求助] 报告基因GFP的检测方法

各位战友,大家有没有做过GFP检测的呢?本人是构建了一个pEGFP-N1的重组质粒,里面插入了目的基因,转化酵母后,接下来要做GFP的检测和表达了。关于荧光方面,深层的原理不是很清楚,然后现在就是收集到一些可以用来检测荧光的方法,我先述说收集的方法,,也在这里做个小小总结如下:
1.GENios Plus多功能酶标仪【定量】
2.紫外分光光度计【定量】
3.流式细胞仪【定量】
4.荧光显微镜【定性】
希望有过此类经验的战友们,都能提提宝贵的意见以及自己的经验。
也为将来做这些方面的朋友们留下一份可以借鉴的帖子吧~~欢迎大家八仙过海各显其能~~期待你们的回帖~~!!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪人25

金虫 (小有名气)

请教一下楼主,检测酵母GFP表达前,需要对酵母进行预处理么?我的酵母对照也出现了绿色荧光,不知道怎么回事
7楼2014-11-10 14:50:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
emma立夏: 金币+2, 有帮助 2012-06-13 09:39:28
你说的转酵母不太懂,只做过转基因植物看亚细胞定位和表达模式的,直接用共聚焦荧光显微镜看的,一般不定量,不知道你做什么用的
2楼2012-06-12 23:03:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

emma立夏

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zgb1982 at 2012-06-12 23:03:05
你说的转酵母不太懂,只做过转基因植物看亚细胞定位和表达模式的,直接用共聚焦荧光显微镜看的,一般不定量,不知道你做什么用的

谢谢,我是做的酵母内GFP定量表达的,就是GFP作为报告基因来检测目的基因的表达量~
3楼2012-06-13 09:40:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niushuaiji

金虫 (正式写手)

不放弃的小鸟

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-13 13:47:33
1,可用定量PCR扩目的基因或是GFP,此法比较简单   2,做western or northern,比较麻烦,但比较经典!至于你说的用荧光强度定量,本人以为可以辅助以上结果!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
Tobeornottobe,that'saproblem
4楼2012-06-13 09:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:09 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见