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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » HPLC流动相改变，组分出峰顺序会改变吗？
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yilishanshan

木虫 (正式写手)

[交流] HPLC流动相改变，组分出峰顺序会改变吗？

流动相改变，组分出峰顺序会改变吗？（同一仪器、同一色谱柱，不是同一天做的实验）
第一天：甲醇-0.1%磷酸，保留时间：甘草苷＜芦丁＜山奈素＜甘草酸
第二天：乙腈-0.1%磷酸，保留时间：芦丁＜甘草苷＜甘草酸＜山奈素

这两天所使用的流动相种类和梯度比例都不一样！

为什么改变了流动相，几个组分的出峰顺序就会改变？
这不是很麻烦吗？我先在某个流动相条件，用单标确定了各组分的位置和出峰顺序，想着再调试流动相，只要进一针混标，就能确定各物质的位置，可这下顺序乱了，还得用单标定性，好纠结呀。

望明白人相告，不甚感激！
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1楼2012-06-12 00:26:34
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回帖置顶 ( 共有1个 )

yilishanshan

木虫 (正式写手)
yilishanshan: 回帖置顶 2012-06-15 00:33:56
我还以为出峰顺序，在大家都是相同的流动相条件下，只能组分自身的极性有关，没想到同一流动相对不同组分的吸附能力不同。
谢谢大家的指点！
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16楼2012-06-15 00:33:44
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qjy_001

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
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leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-06-12 09:03:21
yilishanshan: 金币+1, 对，谢谢！先用混标摸条件，峰都分开了，再用单标定性。 2012-06-15 00:27:13
流动相改变后，会有组分出峰次序改变的现象，这种情况下，你只能用标准品重新定位了。
你可以先用混标进行方法学研究，即色谱条件的摸索，待条件成熟后，再用单标进行定位，这样效率比较高些。
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2楼2012-06-12 01:00:50
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匿名

用户注销 (文坛精英)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-06-12 09:03:33
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4楼2012-06-12 07:50:33
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wpcyh

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-06-12 09:03:41
流动相改变出峰顺序大都会改变，有时pH值改变出峰顺序也会改变。
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5楼2012-06-12 08:33:40
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qq315504520

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yilishanshan: 金币+1, 明白了，谢谢！ 2012-06-15 00:28:23
换流动相的话出峰顺序肯定会变的，但只是调梯度的话出峰顺序应该不会变。说下最近我做梯度的一点建议，之前也是做梯度洗脱，测4个成分，先用的甲醇水，发现基线会飘后来换换了乙腈水和乙腈磷酸水，效果可以。应该先见样品，再在同一条件（流动相，梯度）下进混标，如果样品的峰和混标的峰能一一对上并且分离度很好的话就进单标来确定每个峰都是什么，若果混标和样品峰都对不上或者分离度很差的话就没有进单标的必要了。写的比较乱说的不是很清楚，大致就是这样
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8楼2012-06-12 09:34:16
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shooseal

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢参与讨论！ 2012-08-10 00:23:23
这个是有可能改变的，首先流动相比例的改变会影响出峰时间，由于各组分受溶剂极性的影响不同，所以Rt值的改变会不一样，当影响较大时就会出现峰位置发生改变
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13楼2012-06-13 18:00:58
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普通回帖

qxie

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-06-12 09:03:26
会改变，你大概可以看看峰面积百分比就知道哪个是哪个了。
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3楼2012-06-12 06:32:48
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谷牛牛

木虫 (著名写手)
★
leecius: 金币+1, 谢谢参与！ 2012-06-12 09:03:47
会的！这很正常！
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6楼2012-06-12 08:45:38
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pejawj

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会改变，尤其MP的PH改变时变化会更明显
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7楼2012-06-12 09:22:24
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wuyuwuyu1990

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
流动相的极性改变了，所以对照品出峰时间也随之改变！极性不同，出峰时间不同。
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9楼2012-06-12 09:34:21
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t892893235

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一般只会改变保留时间，而不会改变楚风顺序吧
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10楼2012-06-12 11:17:53
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kkbyb

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 3Q 2012-08-10 00:23:36
选择性不同了，改变是正常的，我有一次同样组成，梯度变化也会导致顺序改变
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11楼2012-06-12 13:24:26
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kennywong

木虫 (正式写手)
会变的很正常
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12楼2012-06-13 09:28:19
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jack250

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 3Q 2012-08-10 00:23:02
流动相变了，看你的就是极性也变了，那么不同极性对不同物质的吸附性质不同，肯定会导致出峰顺序的变化。
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14楼2012-06-14 16:30:48
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yilishanshan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by shooseal at 2012-06-13 18:00:58
这个是有可能改变的，首先流动相比例的改变会影响出峰时间，由于各组分受溶剂极性的影响不同，所以Rt值的改变会不一样，当影响较大时就会出现峰位置发生改变

哦 这样啊 谢谢 有些道理
比例稍微改动 只是保留时间变了 可比例变化大时 保留时间的改变幅度不同 峰的顺序自然就变了
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15楼2012-06-15 00:31:38
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逍遥天使

至尊木虫 (知名作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢发言！ 2012-08-10 00:22:43
最好测定一下两个流动相PH，流动相极性变化影响不大，PH影响比较大，两个流动相中溶剂解离不同，PH会有差异！
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17楼2012-06-15 08:31:25
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sly1008

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会的。
之前看waters的介绍有过这种情况
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18楼2012-06-15 15:16:09
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wonder2002

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
karl2100: 金币+1, 谢谢回复！ 2012-08-10 00:22:25
改变是正常的，甲醇和乙腈的性质不一样，对样品的选择性不一样。不单单是根极性有关。
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19楼2012-08-09 20:13:41
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微笑rose

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
甲醇和乙腈的洗脱能力不一样，对同种物质的洗脱顺序都不一样，流动相变了，出峰顺序也会变，最近我也在做混标的梯度洗脱，各种纠结中
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20楼2013-04-22 11:14:24
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候某人

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by qq315504520 at 2012-06-12 09:34:16
换流动相的话出峰顺序肯定会变的，但只是调梯度的话出峰顺序应该不会变。说下最近我做梯度的一点建议，之前也是做梯度洗脱，测4个成分，先用的甲醇水，发现基线会飘后来换换了乙腈水和乙腈磷酸水，效果可以。应该先 ...

你好，请问一下，做混标的话，是不是要有所有的单标才能定性？非常感谢
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21楼2014-04-22 10:07:50
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53030102

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
甲醇和乙腈的极性，洗脱能力不一样，对被分析物质的保留会有影响的。
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22楼2014-04-30 10:53:18
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