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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有谁知道PE是什么？用来做标记物，红色荧光
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楼1970-01-01 08:00:00
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)
★
wxinxin(金币+1): 谢谢参与
藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)
存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光能，吸收后转化成能量，供其发育生长。当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能转移光能。藻红蛋白PE的吸收波长范围较广，最大的吸收波长为566nm，最大的发射波长为574nm。藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。

红蛋白或称藻胆蛋白是一种来源于藻青菌(Cyanobacteria)和真核菌类相当稳定的具有很强溶解性的荧光蛋白。这些蛋白质含有共价连接的四吡咯基团(tetrapyrolegroup)，其生物学作用是聚集光，通过荧光共振能源传递转化成一对特殊的叶绿素分子，定位在光合反应中心。

    因为具有光收集功能，藻红蛋白的光吸收和发射荧光最大，而内部能量传递或外界pH值或离子组成对荧光猝灭影响降低到最小。藻红蛋白利用共价键结合的形式与抗体免疫球蛋白或其他蛋白质结合，形成稳定的复合。

    应用其复合物进行免疫荧光组织化学、流式细胞仪和FISH的检测，对抗原或DNA、RNA进行定量和定性分析，也是双重标记或多重标记首选的荧光蛋白。

    藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点。
    ①具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；
    ②Stokes移位相当大，具极高的发射量子产率；
    ③荧光不被外部试剂猝灭，通过与蛋白质主链的共价结合, 荧光基团可被保护.
    ④具有非常高的水溶性；
    ⑤有明确分子质量的齐性结构(homogeneousstructure)；
    ⑥与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。
    藻红蛋白可分为D—藻红蛋白(phycoerythin B；B-PE)、R—藻红蛋白(R-PE)和异位(或别)藻蓝蛋白(allophycocyamin；APC)。

    (一)藻红蛋白的光谱特点
    各型藻红蛋白的光量子产率高达o．98，消光系数高达2．4X106cm-1·m01．L-1。以lmol为基准，在可比较的波长，荧光产率等于至少30个未猝灭的荧光黄分子或100个罗丹明分子的荧光产率。
    (二)藻红蛋白的应用
    各型藻红蛋白均有商品化产品，例如二抗标记的B-PE、R-PE和APC，生物素化的B—PE、R-PE和APC，亲和素标记的B-PE、R-PE和APC产品。其敏感性APC最高，其结合物的稳定性B-PE比R-PE更好，但R-PE结合物的稳定性可通过加入1—丙基没食子酸盐(propyl gallate)而增强。可与其他绿色荧光素标记物进行双重免疫荧光组化标记。

我用过的流式抗体用这个的较多，共聚焦等荧光抗体也有
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3楼2012-06-10 23:09:47
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雪舞落

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
wxinxin(金币+1): 谢谢参与
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-10 20:42:17
amisking: 回帖置顶 2012-06-10 20:42:18
你问的是应该是EB吧，EB（Ethidium bromide，溴化乙锭）

溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，可用Polaroid 底片或带CCD 成像头的凝胶成像处理系统拍摄。

观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的NDA条带。
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2楼2012-06-10 20:03:44
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)
唠叨下，这些网上都有的，。。。。。。。。。。。。。

　　FITC（异硫氰酸荧光素）：绿色530nm

　　PE（藻红蛋白）：橙黄色575nm

　　PerCP（多甲藻黄素叶绿素蛋白）：深红色675nm

　　PI（碘化丙啶）：橙红色620nm

　　488nm波长的氩离子激光激发

　　APC（别藻青蛋白）：红色660nm

　　630nm波长的氦氖激光或红色二极管激光激发
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4楼2012-06-10 23:14:56
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★
wxinxin(金币+1): 谢谢参与
PE和PI是常用于染细胞凋亡的
原理就是活细胞的细胞膜和凋亡细胞膜的分子结构不太一样，磷脂酰丝氨酸会在凋亡的细胞中出现外翻的现象，从而导致细胞的通透性改变。
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5楼2012-06-11 13:18:44
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