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songtuo1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活

请问各位大仙,有谁知道如何用DNS法测α-淀粉酶酶活吗?小弟最近正愁这事呢,有人知道的话,教小弟具体步骤吧,急
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pan2qfly

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by protein_ at 2012-06-08 10:17:16
取1mL酶液于试管中,70℃保温15min,迅速冷却后,在40℃下预热15min,然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉,摇匀后40℃下反应5min,迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应,然后取1mL反应液于试管中,加入1mLDNS, ...

请问答主,做α淀粉酶的粗酶液时,加入柠檬酸-柠檬酸钠-缓冲液并研磨后,是常温提取还是放4℃冰箱提取?生物化学书上的案例是常温振荡提取的,有些文献是放4℃冰箱提取1h。请问你用的哪一种?
21楼2021-03-05 15:20:45
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)


zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-07 23:06:34
DNS法其实是测定还原糖含量的一种常用的方法,而淀粉酶可以水解淀粉成为还原糖(葡萄糖),所以你只需取一定量的淀粉,加一定量的淀粉酶,控制好酶作用的条件,然后灭酶活,接着采用DNS法测定其中的还原糖含量,从而推算出酶活大小
分享信息,提高自己
2楼2012-06-07 17:25:57
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microblue

银虫 (小有名气)

生化实验书上就有吧
3楼2012-06-07 19:43:28
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protein_

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
scelab: 金币+5, MicEPI+1, 谢谢热心交流~ 2012-06-10 18:13:13
取1mL酶液于试管中,70℃保温15min,迅速冷却后,在40℃下预热15min,然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉,摇匀后40℃下反应5min,迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应,然后取1mL反应液于试管中,加入1mLDNS,沸水浴5min,迅速冷却,定容至15mL,520nm下测定OD值。
参比:将酶液用氢氧化钠灭活,然后加入淀粉,其他步骤相同。
空白:利用1mL蒸馏水代替1mL反应液,其他步骤相同。
酶活力单位定义:上述条件下底物在1min催化生产1μmol还原糖的酶量定义为一个酶活力单位U(绝干)。
4楼2012-06-08 10:17:16
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